缺血药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能

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遵义医学院硕士论文缺血/药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能及心磷脂的影响
缺血/药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能
及心磷脂的影响

目的本研究采用Langendorff离体灌注建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,察缺血后处理(IPostC和线粒体钾通道开放剂二氮嗪(DZ)药物后处理对缺血再灌注损伤大鼠心功能、心肌酶学、心肌氧自由基、心肌线粒体膜电位、心肌线粒体呼吸功能及心磷脂的影响,并探讨KATP通道开放剂在缺血/药物后处理心肌保护中的作用。
方法:采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型,将SD大鼠随机分为续灌组(C、缺血再灌注损伤组(CON、二氮嗪后处理组(DZ5-葵酸拮抗二氮嗪后处理组(5-HD+DZ、缺血后处理组(IPO5-HD拮抗缺血后处理组(5-HD+IPO)组,每组8例。C组:在Langendorff灌注平衡20min后续灌70minCON组:平衡20min缺血前灌注4ST.Thomas停跳液,全心缺血40min复灌30minDZ组:平衡20min全心缺血40min缺血后给予含二氮嗪50µmol/LK-H液灌注5min后,然后再用K-H液复灌注25min5-HD+DZ组:二氮嗪后处理之前先给予含5-羟葵酸(100µmol/L)的K-H液灌注5min,再用K-H液复灌20minIPO组:平衡20min缺血前灌注4ST.Thomas停跳液,全心缺血40min采用恢复灌注10s、全心停灌10s,连续6次循环(共计2min,然后再用K-H复灌注28min,5-HD+IPO:缺血后处理之前先给予含5-羟葵酸(100µmol/L)的K-H5min,再用K-H液复灌注23min。观察:1.平衡末及再灌注末各组不同时间心功能及心肌酶学的变化;2.平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体,观察线粒体膜电位及氧自由基的变化;3.平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体,观察线粒体呼吸功能的变化;4.平衡末及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体,提取线粒体总磷脂,观察各组线粒体心磷脂含量的变化。
结果:1.心功能(HRCFLVDPLVEDP、心肌酶学(LDHCK、线粒体膜电位(Δψ:各组内再灌注末的心功能、心肌酶学及线粒体膜电位与平衡末比均有显著性差异(P<0.05P<0.01;再灌注末:CON组与C组比有极显著差异(P<0.01DZ组与IPO组的心功能、心肌酶学、线粒体膜电位优于CON(P<0.01

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遵义医学院硕士论文缺血/药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能及心磷脂的影响
但不及C(P<0.05P<0.015-HD+DZ组与CON组比无明显差异,而与C组、DZ组及IPO组比有显著性差异(P<0.05P<0.015-HD+IPO组与CON组及IPO组比均有显著性差异(P<0.05P<0.01
2.线粒体ROS及呼吸功能(3态呼吸、RCRP/O:各组内再灌注末的ROS及呼吸功能与平衡末比有显著性差异(P<0.05P<0.01;再灌注末:CON组与C组比有显著性差异P<0.05P<0.01再灌注末以琥珀酸为底物时DZ组及IPO的线粒体ROS生成减少及呼吸功能明显优于CON(P<0.01,但不及C(P<0.055-HD+DZ组与CON组比无明显差异,而与C组、DZ组比有显著性差异(P<0.01;再灌注末以苹果酸/谷氨酸为底物时DZ组与5-HD+DZ组及CON组比没有明显差异,IPO组再灌注末的ROS及呼吸功能与CON组及C组比均有显著性差异(P<0.05P<0.015-HD+IPO组与C组、CON组和IPO组比均有显著性差异(P<0.05P<0.01;再灌注末:以维生素C/TMPT为底物时,DZ组的呼吸功能(3态呼吸、RCR)与5-HD+DZ组及CON组比没有统计学差异,但5-HD+IPO组与C组、CON组和IPO组比均有显著性差异(P<0.05P<0.01
3.线粒体心磷脂含量:各组内再灌注末与平衡末比均有极显著差异P<0.01再灌注末:CON组心磷脂与C组比有极显著差异(P<0.01DZ组与IPO组的心磷脂明显高于CON组(P<0.01,但低于C组(P<0.015-HD+DZ组与C组及DZ组有显著性差异(P<0.01,P<0.05,与CON组没有统计学差异,5-HD+IPOC组、CON组和IPO组比均有显著性差异(P<0.05P<0.01
结论1.IPostCDZ能改善缺血再灌注大鼠心脏的心功能、保护线粒体膜电位、减少线粒体ROS的产生、保护线粒体呼吸链及心磷脂含量,产生心肌保护作用。2.选择性线粒体ATP敏感性钾通道拮抗剂5-HD能够完全拮抗DZ的心肌保护作用,部分抵消IPostC的心肌保护作用。3.IPostCDZ通过激活ATP敏感性线粒体钾通道产生心肌保护效应,ATP敏感性线粒体钾通道是产生心肌保护的效应器。4.线粒体ATP敏感性钾通道的开放与保护线粒体膜电位、减少线粒体ROS产生、保护线粒体呼吸链及心磷脂含量,可能是IPostCDZ后处理产生心肌保护作用的机制之一。
关键词:心磷脂;线粒体功能;二氮嗪;后处理;缺血再灌注损伤;心肌保护
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遵义医学院硕士论文缺血/药物后处理对离体大鼠心肌线粒体功能及心磷脂的影响
Abstract
ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofisolatedratmyocardialmitochondriafunctionandcardiolipinbyischemic/pharmacologicaldiazoxidepostconditioningduringischemia/reperfusionwiththeLangendorffapparatusandtoconsidertheroleofopeningthemitochondrialATP-sensitivepotassiumchannel(mitoKATPinmyocardialprotectionduringischemic/ischemic.
MethodsLangendorffapparatuswereusedtoestablishthemodelofmyocardialischemiareperfusioninjury.Sprague-Dawleymaleratswererandomizedintosixgroupsof8each:continuousgroup(Ccontrolgroup(CONdiazoxidepostconditioning
group(DZ5-hydroxydecanoate(5-HD
plus
diazoxide
group(5-HD+DZ.Ischemicpostconditioning(IPOand5-HDplusIPOgroup(5HD+IP.HeartsisolatedfromSDratsweremountedonaLangendorffapparatusandstartedwitha20-minperfusionforequilibration.Cwentonperfusionforanother70minutesafterequilibration.CONunderwent40minutesglobalischemiaandfollowedby30minutesreperfusion.DZstartedwith20-minperfusionforequilibrationunderwent40minutesglobalischemiaDZ(50μmol/Learlyirrigationrehabilitationtreatmentafter5minandreperfusion25min;5-HD+DZwasperfusedwith5-HD100μmol/LbeforeDZandthesameprocedurewascarriedoutinDZgroup.IPOstartedwith20-minperfusionforequilibrationunderwent40minutesglobalperfusion10secnds,underwent10secnds,continuoussixsecondarycyclesandperfusion28minute.5-HD+IPOwasperfusedwith100μmol/L5-HDbeforeIschenmicpostconditioningandthesameprocedurewascarriedoutinIPOgroup.Thefollowingparametersweresmeasured:1.Therecoveryofmyocardialfunction:heartrate(HRCoronaryflow(CFleftventricularend-diastolicpressure(LVEDPleftventriculardevelopedpressure(LVDPandmeasuredactivityofactatedehydrogenase(LDHandcreatinekinase(CK;2.reactiveoxygenspeciesROSproductionrateandmitochondrialmembranepotential(MMP;3.mitochondrialrespiratoryfunction;4.mitochondriallipidswereextractedandcardiolipinweredeterminedwithHPLC.

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本文来源:https://www.2haoxitong.net/k/doc/53bf20c069eae009591bec3e.html

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