实验六 植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法
一、目的:
1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
3.学习分光光度计的使用。
二、原理:
糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收,在150 µg/mL范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度,糖含量在30 µg左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较适合。
三、仪器、试剂和材料
1.仪器:电子天平,超声波清洗器,电热恒温水浴锅,抽滤设备,分光光度计,容量瓶,刻度吸管等
2.试剂:
(1)葡萄糖标准液:l00 µg/mL
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。
3.材料:甜高粱,甘草
四、操作步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液:
管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
葡萄糖标准液(mL) | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.6 | 0.8 |
蒸馏水(mL) | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.4 | 0.2 |
葡萄糖含量(µg) | 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 60 | 80 |
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴沸腾起计时,准确煮沸l0 min,取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(µg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取:将样品粉碎,105 ºC烘干至恒重,精确称取1~5 g,置于50mL三角瓶中,加沸水25mL,加盖,超声提取10 min,冷却后过滤(抽滤),残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤(抽滤),滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得可溶性糖的提取液。
3.稀释:吸取提取液2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。
4.测定:吸取1 mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0 mL蒽酮试剂,平行三份;空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(µg)。
五、结果处理:
C × V总 × D
样品含糖量(%)= ───────────── × 100%
W × V测 × 106
其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(µg),
V总——提取液总体积(mL),
V测——测定时取用体积(mL),
D——稀释倍数,
W——样品重量(g),
106——样品重量单位由g换算成µg的倍数
六、注意事项:
1.该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃。
2.H 2SO4要用高纯度的。
3.不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。
七、思考题:
1.用水提取的糖类有哪些?
2.制作标准曲线时应注意哪些问题?
本文来源:https://www.2haoxitong.net/k/doc/fa5eec5f804d2b160b4ec072.html
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