微生物实验总结

食品卫生综合检验试验总结

食品质量091 金秀建 2009016521

为期五天（2012年6月11日-15日）的食品卫生综合检测实验已经告一段落了，在这一周的微生物实验主要包括牛奶中大肠菌群的计数、鸡蛋中沙门氏菌的检验和牛奶中金黄色葡萄球菌的检验三个实验，经过三个综合实验的课程，能让我更能理解试验时要掌握的细节，也要保持头脑的时刻清醒。同时让我对这三种微生物有了更进一步的认识，同时让我也对实验也更加熟悉了。

首先我们做的是大肠菌群的计数，它是采用MPN（最大可能数法）的计数来测定的。大肠菌群的特性为：在37℃，24小时内能发酵乳糖，产酸、产气，好氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。其检测原理为细菌在样品内的分布是随机的，所以检测细菌时，可按概率理论计算菌数。大肠菌群MPN计数的检验程序为样品的稀释、初发酵试验、复发酵试验和最后的大肠菌群最可能数(MPN)的报告。那么在第一天的上午，老师基本给我们讲了实验的原理和步骤，以及一些需要注意的地方，我们便开始计算自己需要配制的实验试剂的量，并且称取试剂的量和清洗所要用的实验器皿，首先配置的是生理盐水和LST肉汤，并且把生理盐水和LST肉汤分装到试管内，盖好盖子包扎好进行灭菌，灭完菌也就到了吃饭时间，等下午来接种培养了。

牛奶样品与生理盐水以1:9的比例进行混合，摇匀后做10倍系列的稀释，做了3个稀释度。随后将三个稀释度的样品匀液以每个稀释度3支试管接种到内装小导管的含LST肉汤的试管中，最后放入恒温培养箱中培养24h。在经过24h的培养后，所有的试管内均产生气体，而后我们要将培养后的有菌落的LST肉汤接种到BGLB肉汤试管中进行培养24-48h，观察后发现所有的BGLB管都产气，颜色也有原来的绿色变成暗黄色，证明也产生了酸，所以记为所有产气管为大肠菌群阳性管。最后查MPN表可得出每毫升样品中大肠菌群的MPN为大于等于1100ml/MPN。

我们小组在做大肠菌群测定还是很顺利的，中途没有出现什么错误，实验很顺利，小组成员的配合和分工也都很好。

第二个实验是鸡蛋中的沙门氏菌的检测，他的特性是：沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10-42℃都可生长，最适温度为37℃，大部分可发酵葡萄糖，产酸产气，是革兰氏阴性的无芽孢杆菌。在营养琼脂平板上生长产生光滑，湿润，半透明，边缘整齐的菌落。在血平板上产生透明溶血环，形成大小中等的灰白色菌落。实验过程可分为前增菌、选择性增菌、选择性平板分离、生物化学筛选四个阶段。

实验首先配制BPW溶液，进行分装和高压灭菌，在无菌条件下，移取5ml鸡蛋液样品于盛有45mlBPW的组织培养瓶中，混匀，放置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24h±2h，观察生长现象。接下来的增菌阶段，需要配制TTB增菌液和SC增菌液，移取1ml的前增菌液接种到10mlTTB增菌液内，在恒温培养箱内培养18h～24h，SC增菌液过程与TTB一样。接下来需要制备BS平板和HE平板，等平板凝固后便可以开始接种了，是采用平板分多区划线的方法，然后放在37度温箱培养18~24h。最后要进行生化实验，要先配制三糖铁琼脂，从培养皿的平板上挑取可疑菌落，接种到三糖铁琼脂，先与底层穿刺，再在斜面划线。同时把菌落接种到各种生化试剂里，封口后一起放入恒温培养箱培养18h。取出培养皿和生化小试管观察结果，记录。

第三个实验是金黄色葡萄球菌的检验，它的特性一般是无芽孢，鞭毛。大多数无荚膜，革兰氏染色阳性，它培养的营养要求不高，在普通培养基上就能生长良好，需氧或兼性厌氧。在血平板上培养会使红细胞破裂，形成透明的溶血环。在显微镜下可以看到是紫色的，排列成葡萄状的圆形的菌。

首先是样品的处理，称取22g7.5%氯化钠肉汤溶解于250ml水中，在每个均质瓶内移取45ml，同时制取Baird-Parker培养基，高压灭菌后吸取牛奶样品5ml到均质瓶内。放入恒温箱培养18-24h。然后用接种环取培养物分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板上，培养18-24h， Baird-Parker平板有可能需要培养45-48h。最后进行血浆凝固酶试验，挑取BP平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5ml左右BHI肉汤中，36±1℃培养18-24h。取新鲜兔血浆0.5ml，加入BHI培养物0.2-0.3ml，振荡摇匀，置36±1℃温箱培养，半小时观察一次，6小时观察，直至出现凝固，判为阳性结果。也有小组6h后也没凝固的，则判为阴性。最后进行革兰氏染色实验，观察细菌的形态特征。最后记录结果。

三个实验虽然不多，但是三个实验的跨度刚好是一个星期，所以我们实验刚好可以做完，实验从刚开始的懵懂到慢慢的熟悉，到最后的成功，少不了的是小组合作和老师的帮助。经过三个微生物的实验，让我对微生物实验的过程。不过对于微生物的实验一定要细心，一个是它需要的时间很长，要灭菌和培养，如果做错都得重新再来，并且实验过程中不能被污染，否则会对实验结果造成一定的污染或完全不可用。对实验流程一定要熟悉，现象一定要观察仔细，因为类似的菌类有很多，其生产的习性也类似，若不观察仔细，就会有结果的偏差。我们小组的实验都很顺利，中途虽有一点点过失，但对实验的进度和结果没有什么大的影响，实验结果也是让我们蛮有成就感的，感谢小组的配合。操作不像理论，只有多次练习才有体会，在今后的实验中，我会更加努力。

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