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正在进行安全检测...

发布时间：2023-11-16 09:02:48 来源：文档文库

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聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法（常用）和光聚合法。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。
连续系统电泳：体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同；
带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统：由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性；
带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率比连续系统电泳的较好。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。
浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
SDS-PAGE各试剂作用

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1.过硫酸铵（APS）为催化剂
2.四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂：
在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构
3.SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。
4.强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
5.聚丙烯酰胺——为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；
制胶缓冲液选择tris－HCL系统；
AP——提供自由基；
TEMED——催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；
十二烷基硫酸钠（SDS）——阳离子去污剂，作用：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间
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本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/e942daa677232f60dccca126.html