动医专业英语翻译文献作业

发布时间：2011-11-22 16:44:14 来源：文档文库

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西南大学

动物专业英语作业

基于龙虾外壳的染色机理，测定β-虾青蛋白在3.2 Å的分辨率

(注：CR 是虾青蛋白的缩写形式，AXT是虾青素的缩写形式)

在蛋白质大分子物质的外缘镶上类胡萝卜素中的AXT，则构成了龙虾外壳的CR。这种CR是龙虾壳能被染为蓝色的原因。CR的结构是由于在溶液中生色基团转变而成，且很长难以测量。无限稀释的AXT会从橙红色，即龙虾煮过后的颜色变为蓝色，并以结合蛋白的形式存在于龙虾体内。提取的CR经过脱水后变成红色，在水化又变成蓝色，这一现象引起我的好奇。进来，X-射线的使用和氙的衍生物产生的CR的亚基A的序列的三维结构进一步证实了CR是从属于脂钙蛋白类的。这一研究发现为β-CR的结晶组成，即包括2个AXT分子结合A1，A2亚基的集合体，提供了分子变换的模型。我们已经确定了A3分子的结构，即de novo。通过使用AXT和生色基团的转换是龙虾壳染色的机理，使其复杂的结构有了进展。蓝色或紫色的AXT普遍存在于无脊椎的海生动物体内，尤其是甲壳纲。β-CR的三维结构已经证实了蛋白质的连接点和结构变化所需AXT控制的原理。

在龙虾的CR中，AXT的存在引起生色基团吸收的转变，在50年前就引起了科学家的研究兴趣。在无限稀释的AXT中，α和βCR顶峰在波长为472nm在己烷溶液中或者在多烯中分别在580nm和632nm处。化学研究包括基态结构和化学综合的类胡萝卜素在生色基团从基态到激发态的所需能量的减少的作用的必须化学物质。酮类在4和4′号位并连接多烯链。甲基在C20和C20′`号位的中心位置，仅有反式的同分异构分子能结合蛋白质。在总体形态和结构上是可以接受少许变化的。β-CR的可见光谱有利于生色基团载色体的螺旋曲折。极速的激发电子表明两个AXT分子是最近的。CR在拉曼光谱下的AXT的最低速电场中的极化。这些光谱与大量蛋白质引起多烯链的变形不一致，尽管在解释光谱时几何形变是很小的。不可思议的13 C的核磁共振的偏转角度和Stark的光谱学在CR中极化对称的AXT中存在生色基团两级不对称现象的解释。一个质子化模型在观察可见光谱和核磁共振后发现其包括在AXT分子的末端接有C-4酮类，在极化过程中有水分子的参与，已经被提出。

有一种β-CR的假定模型，在氨基酸序列的基础上，在非极性环境中，在每个假定的脂钙蛋白亚基的AXT得末端有一个环状。这种模型与之前所提及到的再4和4`号位的酮基由于质子化作用的极化现象相矛盾。过去对染色蛋白的分析认为它总的包括16个AXT分子，这个聚合物由8个40-KDa的二聚物连接有2个AXT分子。这些β-CR是α-CR不可逆的产物，它们这成了2种大约是20-KDa的原体（脱辅机蛋白），Ⅰ类（CRTC）和Ⅱ类(CRTA)与类胡萝卜素结合。这种脱辅机蛋白是根据电泳淌度和其化学性质来命名的：CRTC是由脱辅基CRsC1,C2和A1组成，而CRTA由A2和A3组成。二聚物的结构对A1和A3蛋白质与AXT分子结合有限制作用。对CR最开始的兴趣是由在CR中AXT的光谱转移与在杆状的视紫醇的可见色素中的视黄醇的相似性而激发的。视网膜结合蛋白是由7个螺旋反式的细胞蛋白，视紫质，生色基团组成。光谱转移的原理主要是极化。视网膜以共价键连接，通过质子化作用，以及光谱转移的大小主要是由带电链控制。相反，在类胡萝卜素中的CR是由非共价键连接的。在复合物中的AXT由基态到激发态的能量差，在视紫醇中在0.73。它在与能量有关的复合物中有同样的作用。其它的脂钙蛋白的一个结构单元的环状结构与配合基连接，比如：血浆视网膜结合蛋白，胆汁结合蛋白，在腊梅中胆绿素的大量折叠连接。相反, β-CR所呈现出的晶体结构显露出2个类胡萝卜素的结合点，为了跨越2个结构单元的接触面。因此，光谱转移的三维结构的在异质二聚体的基础上构造的。

材料及方法

提纯和染色：α-CR是在极佳的处于基态的龙虾壳中提取的，通过电子交换和色谱分析法莱达到净化的目的的。这种蛋白质在0.3mM的Tris HCL,PH8.8中经过多次的渗析分离得到β-CR。重要的β-CR[B(A1/A3)]从二聚物中被分离出来是用快速流动的蛋白质液体用色谱分析法得到。这步操作包括从缓冲液A(10Mm Tris• HCL,PH7)和缓冲液B(10Mm Tris• HCL∕0.2M KCL,PH7)以10ml∕min的速度来制备一个有线性梯度的MonoQ HR10∕10圆柱。在含有少量油状物的环境中晶体逐渐形成。大量的结晶实验使用蒸汽漫散技术都失败了.最佳的结晶在4ºC,滴加2ul~4ul在蛋白质含量为10mg/ml在10mM Tris•HCL缓冲液（PH8.0）和1.25M(NaH2/K2H)PO4在PH7在0.05 M Hepes 缓冲液在PH7.5的油中。这步操作需要几周的时间。晶体要在4个月时间才能结晶成一个0.45×0.12×*0.1mm大小，颜色为鲜蓝色，几乎是黑色（在570~580nm下吸收是深蓝色）。在室温环境中，β-CR在结晶缓冲液的最大吸收值早580nm处。

X-Ray溶液结构，结构测定，提纯

收集结晶体x-ray在100 ºK，在Daresbury SRS 2.4T MPW 电波为141，使用San Diego 2×Q4电组装置，把晶体的波长设定在168nm处，且要求水平。在1.448 Å的波长下，每旋转1º曝光90s。60幅高清衍射图像就被记录下来了。数据过程是用DENZO/SCALEPACK来完成的。空间组的测定精确细胞大小在a=b=155.5 Å,c=168.5 Å得到，作为P6322。合并得到的171943个平均测量数据是12.4%（35%是在3.38-3.23 Å的变化范围，完成率是100.0%），其中包括24504个单独的观察数值（几乎是99.7%）I的平均值/sig(I)为15.5（5.5是在3.38-3.23 Å）。包括所有的分辨率变化，金鸡湖是100的完成。外壳的最后两组分辨率的统计量减少他们的使用，反应率是I>3ρ（I）=41%和R的平均值是55.5%在3.23-3.11 Å。在3.23~3.11 Å外壳中，这两个参数分别是27%和81%，检测发现3.23和3.0 Å的清晰地电密度图是唯一可忽略的差异。后来，结构测定和提纯将其分辨率设定在3.23 Å，它是由19698个单独的反射构成。

单个细胞大小表明一个分子的体积是7.55 Å/Da。如果只有一个40KDa A1/A3的二聚物包含不对称的结构，外部通常的变化值。单个细胞体积被蛋白质原子占据小部分为1 6.4%。有83%过量的溶剂量是在3.2 Å衍射减弱的原因。结构测定使用分子代替，作为在CCP4包裹中的应用证实每个不对称的单个细胞中只有一个二聚物。

单个细胞的大小表明一个7.55 Å /Da的分子体积如果一个40-kdaA1/A3的二聚物包含一个不对称的结构，通常是外部值的变化范围。单个细胞被蛋白质原子占据的小部分的体积大概是16.4%。大量的溶剂量大约有83%，可能是3.2 Å分散较弱的原因。用于分子代替步骤的溶液结构AMORE应用于CCP4中，证实了在每个不对称的单个细胞中只有一个二聚物。1.4 Å的ApoCR A1 提纯后的模型用于研究多聚丙氨酸模型。单个细胞结构决定了两种简便的方法。这些方法可以用于坚硬物质的提纯通过使用REFMAC。A1氨基酸序列增加了一个，A3的氨基酸序列是用同源的CαS方法测得的。继续用CNS提纯。用数据库和OOPS2 AXT的调和来检查图形，AXT的6-顺式结构式从美国癌症研究所的三维数据库查的和绘制出了在2F0-Fc的电子云密度图在合适的地方。

AXT的构造（6-S-反）是通过有四个末端环状原子的B的变化值测定的：在6-S-反的结构中，与6-S顺结构相比，B因素略低25%。在每个环上的羟基取代基由省略图所决定。在两个AXT分子间存在不同的电子云密度部分；试图用Hepes分子替代，但是失败了，但是十二烷（即是从石蜡油中）会更适合，尽管哟较高的B值（>80 Å）。气象色谱法分析显示在此油中包含C22，C24，C26。更多的证据关于在两者表面有苯丙氨酸Phe-101(A1) H和Phe-99（A3）的暴露是碳氢化合物，这一现象是不正常的以及可能是一系列的寡聚反应，即a-CR的疏水基之间的相互作用。水分子的结合发生在（Fo-Fc）的相位差间在4？处的傅里叶图的波状图，在那里有明显的氢键存在。总的有30个水分子被发现B在24到62 Å的范围之间变化。在末端环上的中空部分W1和W2水有38和52的B值，相对而言，在6ρ的顶峰处在（Fo-Fc）图上但是没有出现在（2Fo-Fc）的图上再1 均方根的水平上。我们就认为这些水分子是较松的结合相对其他的结合的水分子而言（大约有70%的结合水分子出现在（Fo-Fc）和（2Fo-Fc）图上）。W1与W2之间H键的短距离表明他们的重要性在每个AXT分子的氧的在4和4′keto的链接上同时也可从Fig4c和d上看出。从1.4 Å a1 apoCR 的分辨率（两个亚基）和在0.5 Å的相同位置都可以观察到。末端的B-CR分子模型有Rfactor 21.3%和Rfree 25.1%和由354个aa残基，30个有序排列的水分子，一个Hepes分子，一个十二烷分子，一个Tris HCL分子组成. Hepes分子，十二烷分子，Tris HCL分子的配比数据是从HIC-UP 数据库中获得的。提纯的相关统计资料在表一种以给出。异质二聚体的拉马羌德拉图（无展示）有255个非甘氨酸的残基在最有益的区域（80.3%），额外有60个残基允许的范围（19.0%）。一个残基[ Tyr-112(A1) ]在一般的地方（0.3%），一个残基[ Tyr-110(A1) ]不允许范围（0.3%）。这个表明这是脂钙蛋白类的特征拥有者两个残基作为离群值。这个次生结构的原理是分配通过PROCHECK。针对于A1单体，这里有一个a-螺旋，β-串A1(残基33-36)A2(37-41),B(50-58),C(63-70),D(76-85),E(93-95),F1(103-106)，F2(107-110),G(115-123),H(128-137),一个a-螺旋（147-154）和αβ串 (164-166)。对于A3单元结构有β串跟踪A1(残基28-31)A2(32-35),B(45-54),C(59-67),D(73-81),E(90-94),F1(101-104),F2(105-108)G9113-121）好（125-134），以及一个α-螺旋(142-154)。这个AXT的均方根差异从它们开始的构造是AXT1在2.1 Å和AXT2在2.2 Å上。在2.2 Å D的A1没有结合蛋白的结构和A1结合蛋白的结构存在均方根偏差。如果易弯曲的终点N（14个亚基）是被拒绝的，这个均方根在CAS是0.63 Å.在A1结合点有很大的位置转变也被观察到了（参考结论与讨论）。A3亚基没有结合的结构是不知道的，所以约束力的影响在原子位置上不能被估测。图形是用MOLSCRIPT得到。

结果和讨论：β-CR 的结构. 这种β-CR的晶体结构包含一个A1的异质二聚体和A3在不对称晶胞的原体。A1蛋白有180个残基，A3蛋白有174个残基。这两种分子有35%的序列是相同的（Fig.2a）。这些子单位都具有脂钙蛋白（Fig.2b）典型的树形拓扑就是有一个β桶是由两个β片层组成。β片层Ⅰ让β与A1，B,C,D,E,F1连接起来。由β片层1.1 Å组成的B连接A2，F2，G和H。平均均方根的偏差在两个普通的单元结构是1.1A?.A1和A3的子单位通过环状结构相互影响，而且连接G和H的每一个子单位（Fig.3a）。这种二聚作用是有别于A1/A1的晶体结构的，这是通过两个F的子单位的紧密连接获得的。

类胡萝卜素的范围这两个蛋白质A1到A3，每一个子单位包含每个蛋白质的一半（Fig.3a）。AXTs的有标签AXT1，环状C1-6包含A3的环状结构。这个类胡萝卜素接近7 Å在他们的多烯链的中心位置。两个提纯的AXT的范围有相似性在所有的反式构造（均方根装置在0.3 Å）,在弓形处有标记。Fig.3b和c表明这个计划和观察AXT1开始的边缘和提纯重叠在（Fo-Fc）不同的密度。现在这个尾环在本质上和他们的多烯链是共面的。反之，角黄素的构造相对而言是其中距离晶体结构最近的一个自由的形式，双面角在角度43°。识别这个弓形和末端环状的在高质量图形上是可能的，因为这个数据是高质量的，100%的完全，多样性的。AXT2（未展示）的密度图是较好的。Fig.3d表示的是估测AXT可能含有的能量作为具有扭转角度的作用在末端尾环和多烯链之间。

每个类胡萝卜素的蛋白质环境（Fig.4a和b）是与每个AXT在不同的环境中的两个末端环是不对称的。对AXT1而言，它的C1-6环的环境（Fig.4c）有亲水的Gln-46（A1）和Asn-54(A1)作为残基，它们的氢原子与羟基组O3相接。Tyr-56(A1)和 Tyr-97(A1)链是对水分子有作用力的（W1在蛋白数据库中，IGKA）,与2.60 Å的AXT1 O4是挨得很近的，一起的有Asn-54(A1)是对酮-氢 O4的协调是有用的。其他的亲水残基是Gln-37（A1）和Ser-67(A1)。在末端环状处，很多的亲水残基是存在的，就是Val-52(A1),Ile-65(A1),Ile-95(A1),Phe-134(A1)和Phe-136(A1)。所有的残基和W1表明在AXT1（在0.3和1.0 Å）与C1′-6′环（看下图）所接的残基相比有很小的变化。AXT2 C1-6环（Fig.4d）是由Gln

-41(A3)和Thr-64(A3)来规定的，分别协调羟基与氧O3和羰基与氧O4。因为AXT1是一个结合水分子（W2在蛋白数据库，IGKA）被发现是非常接近的（2.73 Å）到AXT2 酮-氧O4，范围是通过氢连接到Ser-49(A3)和Tyr-51(A3). Gln-32（A3）参与在所有的氢的连接中。Ile-76(A3),Phe-78(A3),Phe-131(A3)

,Phe-133(A3) ，Val-62(A3)，它们参与了疏水基团的残余。

AXT1的环 C1′-6′环（Fig.4e）在A3蛋白质的较小的位置。酮-氧O4′和氢与氧O3′是与His-90(A3)的NE2是挨得很近的，是唯一的一个亲水残基在Phe-86(A3)，Phe-126(A1)， Ile-3(A1), Tyr-128(A1)中。与之前认为的A1的自由形式相比较，表明包括在结合中的残基经过大量的移动（在3.7到9.5 Å之间）。

AXT2的环 C1′-6′环（Fig.4f）是与AXT1相似的，在Keto-氧O4’和氢与氧O3’是与His-90(A3)残基A1的NE2挨得较近的位置。羟基和氧O4’?是与Ser-94(A1) OH 相协调和Asn-86(A1) OD1 挨得很近的。其他的残基出现在Thr-(A3),Asp-(A3),Glu-（A1），Ile-(A3),Tyr-(A3)。这些结合点是比相应的AXT1更易接近水分子，这这些位置残基Phe-126(A1)和Phe-86(A3)是更易接近水分子的通道（Fig.4a vs.b）。AXT的多烯链C7和C7′（Fig.1）的空间结构是一种很好的方式相对于很多的疏水基。因此，对于AXT1Pro-4(A1), Phe-6(A1),Val-7(A1)

,Tyr-45(A1),Tyr-124(A1),Phe-132(A1)存在一个结合中心的位置其中包括中心甲基组C20和C20′（Fig.4a）。对AXT2而言，存在疏水基相同的位置，就是Pro-4(A3),Phe-6(A3),Tyr-40(A3),Ile-93(A3)Phe-129(A3（Fig.4b）.Phe-101(A1),

Pro-104(A1),Ile-122(A1),Phe-99(A3),Pro-102(A3)Ile-120(A3)是夹在两个类胡萝卜素的中间的（Fig.4a和b）。A1中的一些残基实质上在结合物上迁移（Phe-6在3.6 Å，Pro-4在6.7 ÅVal-7在3.6 Å， Phe- 101ZAI 6.2 Å)一个相同的比较不能进行

再A3中，因为它的自由的结构没有被确定。多烯链和他们都是挨得很近的，这样可以激发电子的相互作用，这是从CD光谱学得到的。然而拉曼共振光谱学验证不是由于光谱的转移，这可能要求挨得更近才能发生相互作用。整个过程不能发生没有中心的C20和C20′甲基稳定的和蛋白质发生相互作用，这是由结构透露出来的。因此，AXT的中心还是在原位。

两个AXT的结合点有很多的保全的氨基酸残基，两个结合水的W1和W2有相同的功能。Fig.4c和d表明在末端环（C1-6）和蛋白质（括号内的残基来自亚基A3）:Gln-46(Gln-41),Phe-134（Phe-131），Phe-136(Phe-133) , Gln-37（Gln-32）, Tyr-56（Tyr-51）, Ile-95（Ile-93）之间发生相互作用。而且，这里存在一些保守的氨基酸Leu-40(Ile-35),Val-52(Ile-47),Ser-67(Thr-64)从A1到A3发生变化（后者在括号中）,然而Asn-54变成了Ser-49,Tyr-97由Phe-78所代替在A3中。考虑到C1′-6′环状（Fig.4e和f）环境是唯一保存的残基在A1和A3（后者在括号中）是His-92（His-90）,Pro-104(Pro-102)以及Tyr-128(Tyr-125).AXT2中羟基C1′-6′结合环的位置变成AXT1的羟基，存在Tyr-94（A1）变成了Ieu-92(A3)，Glu-90（A1）变成Phe-86(A3). 更重要的是，这里有一个水分子，与两个AXT的其中一个酮-氧键紧密接触。两个水分子在相同的位置在A1/A3蛋白质的二聚物的未结晶的两个折叠对称部分。而且，在载体蛋白CR的结构中观察W1是接有0.5 Å的水分子中，这一点决定亚基A1哟一个更高的分辨率在1.4 Å。W1的位置在晶体或者A1单元结构单独存在的形式都被占据。在β-CR 的预测结构中是没有出现的。

结构红移的原理：红移的出现时很多不同的类胡萝卜素不稳定的结果。第一，末端环在本质上是与多烯链共面的（Fig3c）,扩展结合面，即使是有那个趋势的和变更在电荷基态。这是与传递视觉的视紫红质2 Å是类似的，在β-紫罗酮环是与多烯链是共面的。第二，末端环酮-氧键在氢键结合与两个水分子和两个His 中的氮的相接点（Fig.4）配合基的极化可能是导致再AXT 中产生一个永久的感生偶极矩的原因。这些水分子不是所观察中最有序的可能是相对易于脱水的，可能让末端环变的松弛，导致与多烯链不共面。这种效果也可能会产生当蛋白质的第三级结构变性。环的平坦化的增加可以部分的解释红移。然而，多烯结构的额外的电子离域因为W1，W2，His-92（A1）和His-90(A3)的氢是连接到酮-氧是需要的。这一观点在一个结合的水分子可能是包括在里面的是支持的。因此，它准确的位置确定了。每个类胡萝卜素中不对称的环境解释了这个现象，即酮-氧的结合在不同的减速，正如光谱中预测的。类胡萝卜素的两个停靠点促使标记每个类胡萝卜素。量子论的计算可以探测弯曲的类胡萝卜素是否有助于红移以及量的多少。β-CR的红移光谱一致可以从蛋白环境中获得，因为比如在20nm处，AXT 的吸收峰在己烷和氮苯中的对比可知是不同的，这一现象被认为是折光率的原因。极为贴近的芳香链的π-轨道是可以提供的。紧邻的类胡萝卜素缺少带电残基可以排除静电作用是光谱移动和与视紫红质的情形相比是有关联的。但是，总的说来，在58nm处的红移现象是可以用β-CR 的结构来解释的。

在63nm处α-CR发生了移动，这一结构或者是由β-CRs的一个四聚物或者是一个螺旋物。β-CR的晶体在xy平面有一个A3三聚物的填充，垂直于A1二聚物的层面沿着z轴。在三聚物的结晶周围的大多数的相互作用形成了三层的重叠：Asn-20和Thr-167′和Cys-170′:Asp-22和Tyr-31′Arg-29和Tyr-172′:Arg-24和Asn-50′.很强的相互作用在A1二聚物中在晶体周围的双层折叠中包括Asn-75和Asn-75′和Thr-177和Thr-180′晶格的接触是由Lys-61(a1)和Glu-157（A3）和Ser-159（A3）通过结晶的对称，这一对是与相似的一对连接，但是这一部分及其的长，因此，不同于生动的α-CR。一个结构机理要求在一串的结构中停止，之后 8个β异质二聚物已经转配形成α-CR。有趣的是，b-异质二聚体结构有一个表面暴露的疏水基。（A1 Phe-6，A1Phe-101，和A3 Phe-99），在靠近AXT结合点的原子中心位置。（Fig.4a和b）,是一个可能的结构关于亚基-亚基的深层结构的相互作用。尽管一个貌似可信的寡聚化机理是通过连接二聚物取得里连接，其它的原因也肯定被包含，因为β-CR是从α-CR中分离产物的一个不可逆的结构。

结论：总的说来，在龙虾β-CR的类胡萝卜素的红移光谱作为基础结构已经报道。现在是很明显的龙虾仔结构上是怎样利用AXT去产生蓝/紫色的。蛋白成分的本质结构在不同的动物或者类群中是不同的，但是在无脊椎的多样性物种的类胡萝卜素蛋白的结构研究是较少的。分子的设计者可以充分利用我们在分子综合体的研究结果，比如类胡萝卜素的包裹化在稳定的圆柱状的位置。比如，可用于食物的着色剂或者用于特殊染料的红移。一次参数在末端环与多烯链的共面性，氢键与酮氧基的结合方面是有差异的。而且，一种定向的传送AXT的方法，在一般的，水环境中是不能溶解的，比如治疗各种疾病的药现在是可能的。而且已经获得洞悉，在分子水平，在烹饪上的效果（以及脱水），改变β-CR的性质会导致与AXT的连接松弛。脱水是可逆的，尽管颜色的改变是与烹饪后相似的。后者可能包含所有的和不可逆的性质改变。

我们是非常感激george britton(利物浦大学)，john Sutherland，和jonathan clayden（曼切斯特大学），参与我们的讨论。我们感谢srs daresbury laboratory以及英国研究协会jiont biology program的同步加速器辐射的使用。我们感谢基金会授予我们科研补助金。我们感谢工程和物理科学研究协会以及曼切斯特大学给于研究生的博士生奖学金。感谢生物技术和生物科学研究协会基金提供了曼切斯特化学结构研究的处理技术和制图室。

参考文献：略

摘要

Abstract：One hundred,1 3-day-old,Leghorn chickens were randomly divided into 5 groups with 20 chickens each.In groups 1,2,3,4,5,birds received diclofenac sodium by oral feeding at the levels of 2.5 mg/kg,3.5 mg/kg,4.5mg/kg,7.5mg/kg and 0mg/kg respectively.24h,48h and 72h post treatment,all birds were examined for clinical signs, necropsy findings, histopatological lesions and clinical pathologi—cal changes(Serum levels of uric acid(UA), blood urea nitrogen(BUN),potassium(K),sodium(Na),calcium (Ca),chloride(C1)and pH)to allow for the further characterization of diclofenac's mechanism of toxicity. The results showed that 4 dead birds of the 7.5 mg/kg-group developed gross lesions of visceral gout,while birds of other groups showed no manifesting visceral urate deposition. Microscopic examination revealed significant renal changes in dead birds manifesting visceral gout and these changes included u-rate deposits associated with tubular necrotic changes.24h post treatment,serum level of uric acid andblood urea nitrogen level all increased in birds.It was concluded that development of gout in birds may be related to diclofenac impairing kidney.

摘要：100只13日龄白来航雏鸡随机分为5组，每组2O只鸡，第1～4组为试验组，第5组为对照组，通过口腔灌服途径，给试验组鸡不同剂量的双氯芬酸(2．5mg／kg、3．5mg／kg、4．5mg／kg、7．5mg／kg体重)，喂药后24h、48h、72h观察鸡的I临床症状、病理组织学变化及I临床病理学指标(血清尿酸(UA)、血清尿素氮(BUN)、血清K 、Na、Ca 、C1一和pH值等)检测，以阐明双氯芬酸的毒性作用。结果表明：给予7．5mg／kg体重剂量的药物对雏鸡产生毒性作用，2O只鸡中有4只鸡发生死亡，剖检发现有明显的内脏型痛风的病理变化，显微镜观察，肾小管内有尿酸盐沉积、肾小管坏死等病理变化，在肾、肝和脾脏中可见痛风石形成。在喂药后24h，鸡血尿酸水平显著升高，BUN浓度也升高。其他试验组没有明显的变化。结论：双氯芬酸通过对肾脏的损伤作用，诱导鸡发生内脏型痛风。