植物内生放线菌及其生理活性物质研究进展

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第28卷第3期 2011年6月 志 JOURNAL OF BIOLOGY VoI.28 No.3 Jun,2011 doi:10.3969/j.issn.2095—1736.201 1.03.077 植物内生放线菌及其生理活性物质研究进展 黄小龙,周双清,陈吉良 (海南大学农学院,海南儋州571737) 要:植物内生放线茵是一类具有巨大开发潜力的新微生物资源。目前从许多活体植物组织内已分离到种类众 多的植物内生放线茵,已有的研究表明植物内生放线菌能产生许多重要的生理活性物质,如抗生素类物质、植物生 长促进剂、植物生长抑制刺以及具有新特性的酶类。植物内生放线菌在农业生产、医药新药的筛选上显示出广阔的 应用前景。 关键词:植物内生放线茵;活性物质;生物多样性 中图分类号:Q939.13 2 文献标识码:A 文章编号:2095—1736(2011)03—0077—03 Research advances on endophytic actinomycetes and their bioactve metaboles HUANG Xiao—long,ZHOU Shuang—qing,CHEN Ji—lang (Agronomy Colege,Hainan Universiy,Danzhou 571737,China) Abstract:Endophytic actinomycetes are a new microbiological resources for development of potentials.Till now,many kinds of endo— phytic actinomyeetes were isolated from many living internal plant tissues.Endophytic actinomyeetes CAll produce a lot of import physiological bioactive metabolies such as aibiotcs,plant growth promoters,plant growh inhibiors and new characteristc enzymes. This paper summarzed the recent advances on the studies of endoph ̄ic actinomycetes of plants and their bioactve metabolies. Keywords:endoph ̄ic acfnomyeetes;bioactive;biodiversity 植物内生菌是指其生活史的一定阶段生活在活体 植物组织内、又不引起植物明显病害的微生物。内生 菌从形态上可分为内生真菌、内生细菌以及内生放线 菌。由于内生放线菌生长缓慢,分离比较困难,因此与 (Stptomyce scabies)是首先发现的植物来源非弗兰克 氏属的放线菌 。此后,许多研究表明链霉菌广泛分 布在各种已研究过的植物体中,成为目前研究得最多 的植物内生放线菌。而其他稀有放线菌属的内生放线 其他两类内生菌相比,总体上对内生放线菌的研究相 对较少。但迄今的研究表明,植物内生放线菌不仅宿 主分布广泛、种类丰富多样,而且还产生丰富的生理活 性物质,在农业生产、医药新药的筛选上显示出广阔的 应用前景。本文主要对近年来发表的植物内生放线菌 的生理活性物质及其应用现状进行综述。  植物内生放线菌的分布与多样性 植物内生放线菌几乎存在于所有已研究过的植物 中,分布广,种类多。弗兰克氏菌属(Frankia)是最早 被发现的内生放线菌。弗兰克氏菌的寄主广泛,可以 与8科24属共200多种非豆科植物共生,形成放线菌 菌如:小单孢菌属、诺卡氏菌属、小双单孢菌属、链轮丝 菌属、链孢囊菌属、Actnosynnema、Arhrobacter、Curobac— erum、Kocura、Kineospora、Actnomadura等也陆续从许 多宿主植物中分离得到。最近,Qin等 采用多种预 处理方法从云南西双版纳热带雨林的近90个药用植 物样品中,选择性分离到32个不同种属的内生放线 菌,并从中发现了许多新的放线菌菌种。我们实验室 利用多种培养基从海南的12种药用植物中也选择性 分离到相当多的链霉菌、小单孢菌、诺卡氏菌、野野村 菌以及拟无枝菌酸菌等属的放线菌新种 。这些研究 证实了植物内生放线菌是一类分布广、种类多样且尚 未被充分挖掘的新微生物资源。 根瘤。除弗兰克氏菌外,马铃薯疮疥病的疮疥链霉菌 收稿日期:2010—07—13;修回日期:2010—08—04 基金项目:海南省高等学校博士生创新科研课题(Hxwby2008-07) 作者简介:黄小龙(1977一),男,湖南武冈人,博士、讲师,研究方向:应用微生物资源,E—mail:hx12012@163.cor 77 
第28卷第3期 
2011年6月 志 JOURNAL OF BIOLOGY VoI.28 No.3 Jun,2011 植物内生放线菌生理活性物质研究 2.I抗生素类物质 (Lemna minor)显示强烈的除草活性。邱志琦等 分 离的番茄内生链霉菌s5的代谢产物能抑制草籽的发 芽,该活性具有潜在的除草效能。 2.4新特性酶类 植物内生放线菌产生一些重要的化合物,有些具 有新的化学结构。不少菌株产生抗细菌、抗真菌、抗肿 瘤物质。有报道从蓬莱蕉、印楝、杜鹃花、桃叶珊瑚、龟 背竹属植物分离的内生放线菌具有良好的抗菌活性, 植物内生放线菌还产生多种多样的酶以适应其独 特的生活环境。Stamford等u 从豆薯块茎中分离的内 生拟诺卡氏菌(Nocardipsi sp.)产生的仅一淀粉酶在 并产生了新的抗生素 ;从蛇藤植物(Snakevine)分 离的内生链霉菌NRRL30562产生4种新的广谱抗生 素munumbicins A、B、C、D,对耐药性细菌及疟原虫有 70 ̄C条件下活性达到最大值;从玉米叶片分离的内生 链孢囊菌(Stptosporangium sp.)能够产生最适温度为 抑制作用 ;从卫矛科(Celastaceae)植物分离的内生 链霉菌MaB.QuH.8产生新的氯吡咯(Chloropyrro1)抗 生素对多种耐药性细菌和分枝杆菌都有抑制活性;最 近从一株内生小单孢菌新种中分离到2个新的蒽醌类 化合物显示了很好的抗肿瘤活性…;该类研究充分证 明了植物内生放线菌是寻找微生物新药的又一个重要 药源以及在生物防治上的良好潜力。 2.2植物生长促进剂 garashi等 从蕨类植物(Ptridium aquinum)分 离的Stptomyces hygroscopicus TP—A0451的发酵液中分 离到pterdic acids A、B,这两种化合物具有植物激素相 似的功能,在浓度1nM下,与吲哚乙酸一样能够加速 芸豆胚轴须根的形成。Manuls等报道了一些植物来 源的链霉菌包括S.violaceus,S.scabis,S.grseus,S. exfolatus,S.coelolor和S.1vidans在培养基中添加 L一色氨酸作为前体物质,能够产生吲哚乙酸(IAA)。 Megu『o等分离的植物内生放线菌Srpmmyees印.MBR一 52能够在杜鹃花组培苗中定植,并能促进杜鹃花组培 苗根的萌发和生长,推测Stptomyces sp.MBR-52可能 释放了促进植物生长的某种激素,表明该菌株在加快 组培苗的快速生长,减少组培苗受病原菌感染的机会 方面具有广泛的应用前景。 2.3植物生长抑制剂 Okazaki报道了一些植物内生放线菌产生一些除 草功能的抗生素 。从厚穗狗尾草(变种)(Setaria. vidi var.pachysachys)叶片分离的链霉菌SANK 63997产生除莠菌素(Herhicidin)。从凸脉苔草(Carx kobomugi)分离的小双孢菌SANK 62597在发酵液中产 生 .glutamylmethionine suloximine,这种代谢产物在植 物体内能够转换成强除草活性的蛋氨酸亚砜(Methio- nine suloxide)。而从狗筋蔓属(Cu ̄ubalus sp)植物分 离的Dactylosporangium sp.SANK 61299能够产生抑制 甘蓝型油菜(Brassica rapa)萌发的植物生长抑制剂。 Gebhardt等 发现Stptomyces anulatus能产生新的吩 嗪化合物(Endophenazines A—D),这些化合物对浮萍 78 70℃的葡萄糖淀粉酶(Glueoamylse),在淀粉加工工业 上具有广泛的应用前景。Valois等从悬钩子的根上分 离的一株放线菌可产生葡萄糖苷酶,接种至悬钩子幼 苗可降低根部发病率。蔡爱群等 分析了水稻内生 放线菌产纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶的酶活性,结果 表明52%的菌株具有纤维素酶活性,35%的菌株具有 木聚糖酶活性,61%的菌株具有果胶酶活性。 植物内生放线菌的应用前景 3.1在农业生产上的应用 许多研究表明,在离体培养条件下,植物内生放线 菌具有拈抗植物病原菌的能力,因此植物内生放线菌 已成为筛选植物生防菌的又一重要微生物资源。 Shimiu等 利用从杜鹃花分离的内生链霉菌R-5 回接杜鹃花组培苗,发现其能在组培苗内定殖和生长, 并且增强了杜鹃花叶片抵抗病原菌(Pesalotpss ydowiana)人侵的能力;Nishimura等u卜 从山月桂植 物分离的内生链霉菌AOK-30按种组培苗后,不仅增 强了组培苗抵抗植物病原菌(Pestalotps sydowiana) 的能力,同时也提高了组培苗抗旱、抗渗透压的能力。 因此,利用内生放线菌接种组培苗被认为是一种培养 具有抗病性、抗旱性组培苗的新途径。而在大田实验 条件下,澳大利亚弗林德斯大学的Chrisopher Franco 领导的研究小组经过5年的研究,利用内生放线菌能 够防治小麦全蚀病,而且提高了小麦60%的产量 引。 3.2在医药新药开发上的应用 植物内生放线菌产生的生理活性物质,不仅促进 宿主植物的生长,增强宿主植物的抗病、抗逆的能力, 而且对人体的病原菌也具有广谱的抗菌作用,而从药 用植物分离的内生放线菌还特别适合抗肿瘤活性物质 的筛选。刘宁等 从西双版纳的药用植物分离的165 株内生放线菌中有78%的内生放线菌表现出抗肿瘤 活性。Hong等 从红树林分离的内生放线菌中筛选 到大量的抗结肠癌116细胞毒活性菌株。我们实验室 开展了海南药用植物内生放线菌的研究,发现药用植 物内生放线菌的抗肝癌SMMC-7721细胞毒活性比例 
第28卷第3期 志 Vol_28 No.3 2011年6月 JOURNAL OF B10LOGY Jun, 201l 远高于根际土壤放线菌 。此外,从药用植物内生放 n Selectve Isolaton of Rare Actnomycetes(Ed.I.Kurtb0ke).Na- 线菌中还能筛选到抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Prot i ona Library of Australa。2003102—121. yrosine phosphatase 1B,PTP1B)和Capase-3等酶活性 [11]Gebhardt K J,Sehimana P,Krastel K,et a.Endophenazines A.D. new phenazine antbiotcs from the arhropod associated endosymbiont 的菌株 ' 3。因此,植物内生放线菌在微生物新药的 Streptomyces anulatus.I_Taxonomy,fermentatonsolation ad bio. 筛选上也显示出广阔的应用前景。 ogical actvies[J].J.Antbiot,2002,55:794—800. [12]邱志琦,曹理想,谭红铭,等.番茄内生链霉菌s5的分离及其除 参考文献: 草活性.农业生物技术学报[J],2005,13(4):538—543. [1]张一宾.由植物中放线茵产生的植物生理活性物质[J].世界农 [13]Stamlord T L M,Stamford N P,Coelho L C B B,et a1.Prducton 药,2003,25(1):9~14. and characlerizaon of a therostable d・amylase from Nocardiopss [2]Qin S,Li J,Chen H H,et a1.Isolaton,diversiy,and antmicrobial sp.endophyte of yam bean[J].Bioresource Technol,2001,76:137 141. actviy of rare actnobacteria from medicinal plants of ropica rain for- ests in Xishuangbanna[J].China Appled and Environmenta Microbi [14]蔡爱群,田新莉,周世宁.水稻内生放线菌降解酶活性的分析 ology,2009,75(19):6176—6186. [J].韶关学院学报(自然科学),2007,28(3):107—109. [3]黄小龙.海南十二种药用植物内生及根际土壤放线菌的分离、鉴定 [15]Shimizu M,Nakagawa Y,Sato Y,et a1.Studies on endophytc act 及生物活性[D].海南大学博士学位论文,2009. nomycetes(I)Streptomyces sp.isolated fom Rhododendron ad i [4]Hasegawa S,Akane M,Shimizu M,et a.Endoph ̄ie actnomycetes antungal actvity[J].J Gen Plant Pathol,2000,66:360—366. and thei interactions wih hos plants[J]. Actnomycet0l0gica,2006, [16]Shimizu M,Fuita N,Nakagawa Y,et a1.Disease resistce of ssue— 20:72—81. culured seedlings of Rhododenon afer treatment wth Streptomyces [5]Verma V C,Gond S K,Kumar A,et a1.Endophytic actnomycetes sp.R-5[J].J Gen Plant Pathol,2001,67:325—332. om Azadiachta indica A.Juss:isolaton,diversiy,and antmicrbi [17]Nishimura T,Meguro A,Haegawa S,et a1.An endophytc actno—  actviy[J].Microb Ecol,2009,57:749—756. myeete,Steptomyces sp.AOK・30,isolated fom mountain Laurel ad [6]Castillo U F,Stobel G A,Ford E J,et a.Munumbicins,wide.spec— s aunga actviy[J].J Gen Pl Pathol,2002,68:390—397. um antbiotcs produced by Streptomyces NRRL 30562,endophytic on [18]Hasegawa S,Megur A,Nishimura T,et a1.,Drought tolerance ofts— Kennedia nigrsca[J].Microbiology,2002,148:2675—2685. sue—culured seedlngs of mountain Lurel(Kalmia tatfolia L.)in— [7]Igarashi Y,Trujo M E,Martnez—Molna E,et a1.Antumor anthra— duced by an endophytic actnomycete I.Enhancement of osmot pres— quinones fom an endophytc actnomycete Micromonospora lupini sp. sure in leaf cels[J].Actnomycetologica,2004,18(2):43—47. nov[J].Bioorg Med Chem Lett,2007,17:3702—3705. [19]Franco C,Michelsen P,Percy N,et a1.Actinobacterial endophytes [8]Igarashi Y,Iida T,Yoshida R,et a1.Pteridic acids A and B,novel r improved crop performance[J].Aust Plant Pathol,2007,36:524 plant growth promoters wi auxin—ke actviy from Steptomyces hygro— 531. scopicus TP・A0451[J J.J Antbiot,2002,55:764—767. [20]刘 宁,张辉,郑 文,等.药用植物内生放线茵的生物活性 [9]Megur A Y,Ohmura S,Hasegawa M,et .An endophytc actnomy- 及菌株D62的代谢产物分析[J].微生物学报,2007,47(5):823 cete,Steptomyces sp.MBR一52,that accelerates emergence and elon- 827. gaton ofplant adventous roots[J].Actnomycetologiea,2006,20:1 [21]Hong K,Gao A H,Xie Q Y,et a1.Actnomycetes f marine drug 9. discovery iolated fom Mangrove sois and plants in China[J].Mar [10]Okazaki T.Studies on actnomycetes isolated fom plant leaves[M]. Drugs,2009,7:24—44. (上接29页) l54. [6]Young R J.Two approaches to environment enrchment[C] In: [14]杨晓君,杨岚,王淑珍,等.笼养大紫胸鹦鹉的活动时间分配 Envinmental Enrchment for Captve Animals,2003,6—7.UFAW [JJ.动物学报,1998,44(3):277—285. press- [15]宁 宇.太阳鹦哥:饲喂方式的改变引起的相应行为时间的改变 [7]Kim L C,Garner J P。Millam JR.Preferences of orange-wingedAm— [J].世界动物园科技信息丰容与训练专集,2007,16:61—62. azon parrots(Amazona amazonica)for cage enrchment devices[J]. [16]Caraco T.Time budgeting andgoup size:atest ofteor[J].Eco1. Appled Animal Behaviour Science,2009,120:216—223. ogy,1979,60:618—627. [8]Forshaw J M.Parrots of the Word[M].Copyright by Lansdowne [17]Enoksson B.Time budgets of Nuthatches Sia europaea wih supple. Press.1973.1—584. mentary food[J].Ibis,1990,132:575—583. [9]del Hoyo J,Elot A,Sargatal J.Handbook of the birds of the world [18]Meehan C L,Garner J P,Meneh J A.Envinmental enrichment [M].Copyrisht 1973 by Lynx Edicions,1973,1—175. and development of cage stereotypy in orange—winged Amazon pa- [10]杨春花,王小明.大熊猫的刻板行为及其矫正对策——丰富圈 rots(Amazona amazonica)[J].Dev Psychobiol,2004,44:209— 养环境举措[J].四川动物,2006,24(3):529—532. 218. [11]田秀华,张丽烟,王晨.动物园环境丰容技术及其效果评估 [19]Lindsrom L,Alatalo R V,Mappes J.Reactons of had.reared ad 方法[J].野生动物杂志,2007,28(3):64—68. wid—caught predators towards warningly colored,gregarious and con— [12]Lehne P N.Hadbook of etological methods(2 edion)[M]. spicuous prey[J].Behav Ecol,1999,10:317~322. Cambrdge Univerity Press.1996,181—230. [20]Janson C H.Adaptaton of  morphology to disperal agents in a [13]蒋志刚.自然保护野外研究技术[M].中国林业出版社:2002, neotopica forest[J].Science(Wash.),1983,219:187—189. 79 

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