绿荧光蛋白基因质粒表达载体对SACC-83的转染效率及瞬时表达特点
作者：苏涛
作者机构：湖州师范学院医学院,浙江省湖州市,313000
来源：中国组织工程研究
ISSN：2095-4344
年：2007
卷：011
期：006
页码：1087-1090
页数：4
中图分类：R3
正文语种：chi
关键词：绿色荧光蛋白质类;癌,腺样囊性;基因;转染;脂质体
摘要：目的:检测绿荧光蛋白基因(EGFP)质粒表达载体pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP对SACC-83的转染效率及瞬时表达,为应用这两种启动子诱导促凋亡基因转染SACC-83以发挥治疗作用提供依据.方法:实验于2004-07/2005-05在吉林大学口腔医学院口腔生物实验室完成.①在体外扩增并酶切鉴定pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP质粒.②以脂质体介导法转染pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP进入SACC-83细胞,根据质粒和脂质体比例不同分别转染6组,1组:1 g/4 L;2组:1 g/8 L;3组:1g/12 L;4组:2 g/4 L;5组:2 g/8 L;6组:2 g/12 L.③应用荧光显微镜观察各组转染效率及瞬时表达情况,并进行统计学分析.结果:①质粒的检测及鉴定:质粒pACTERT-EGFP和pACCMV-EGFP经转化、酶切电泳证实,均出现约800 bp的片段,与原作者提供的数据一致.②荧光显微镜观察:绿荧光蛋白在基因转染24 h后开始表达,48～72 h最高,1周后表达逐渐减弱.③荧光细胞数的统计学分析:对不同浓度质粒与脂质体转染72 h的荧光细胞数进行方差分析,质粒与脂质体比例为1 g/8 L和2 g/8 L组荧光细胞数显著高于其余各组,其差异具有统计学意义,说明转染效率与脂质体和质粒的比例有关.结论:按照合适的质粒和脂质体比例,pACCMV-EGFP和pACTERT-EGFP转染SACC-83的效率可以达到30%,是转染SACC-83较为理想的瞬时表达载体.
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/6a154ccb5cf7ba0d4a7302768e9951e79b8969fb.html
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