精子标准版SOP

SQA-V精子质量分析仪

1. 工作环境

1.1不要在SQA-V附近使用手机，不要在同一个台子上放置会产生震动的其他仪器；避免暴露于水和灰尘。

1.2仪器工作时环境温度为：15-38℃，检测精子样本的温度为：22-26℃。

2. 准备工作

2.1 开机：打开后面板电源，点击SQA-V键盘左下方ON/OFF按键，进入自检和自稳定。

注意：有进度条提示，耗时约5分钟！

2.2检查剩余测试数：通过自检后，检查屏幕提示的剩余测试数，确保剩余测试数大于日平均样本量3倍。【自检失败请参阅附录1，添加测试数请参阅附录2】

2.3检查光电测量仓：查看自检参数是否在给定的范围内，若超出范围请进行清洁。【请参阅附录1】

注意：请务必每天检查自检参数，若不能确认在可接受范围内可能影响仪器正常使用！

2.4检查视频仓：调节可视化系统的成像质量至最佳状态。【可视化系统的调节请参阅附录3】

3. 样本采集及预处理

3.1 待测样本要求：

3.2对病人取样指导：

3.2.1取样前，禁欲2-7天。只能通过手淫方式取精，禁止使用润滑剂，含精子杀伤成分的试剂和其他任何可能造成样本污染的试剂。

3.2.2所有样本必须采集进清洁无菌容器内 (建议使用医生或实验室提供的容器)采样后立即送至实验室 (如果不在现场采样) 。

3.2.3运送途中确保样本处于室温下保存，禁止加热或者冷却样本及容器。

注意：超过一小时的样本，其活力将大幅下降，样本偏离真实状态的程度与时间成正比，当通过测试结果

评估病人状态时需要尽可能多的考虑外界因素对结果造成的影响！

可拒收样本: 样本距离采集时间已超过两小时。

3.3等待液化：收取的样本放置在样品杯中，等待其充分液化后再采样检测。等待60分钟后仍未液化的

样本需要处理，处理方法可分为以下两种情况：

①用户已采购MES官方液化剂，请根据液化剂说明书使用试剂。

②用户未采购MES官方液化剂，可根据《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验室

手册》第2.3.1进行检测。【液化延迟请参阅附录4】

注意：样本需要在完全液化的情况下进行检测，否则精子无法均匀分布于样本中，取样误差对结果会造成

巨大影响！

3.4样品洗涤：如果样本存在肉眼可见杂质，则需要洗涤后再取样。如果样本没有肉眼可见杂质请跳过本操作，直接进行下一步取样。

3.5取样：根据样本体积用一次性精子采样管进行取样，情况如下：

3.5.1大于等于0.5mL，使用采样管采取正常量样本；

3.5.2大于等于0.25mL小于0.5mL，有两种测量方法：

① 吸入20μL精液样本仅充满采样管前端薄片区域，只获得精子活动率参数；

②用稀释液按1:1稀释样本，使用采样管采取正常量样本，获得所有参数；

3.5.3小于0.25mL，吸入20μL精液样本仅充满采样管前端薄片区域，只获得精子活动率参数。

3.5.4采样管前端薄片区域吸不满的样本，建议涂片后- 2 -用显微镜观察。

3.6初检：把采样管放入可视化视频仓，在SQA-V键盘上按住ZOOM-OUT直至图像不变使放大倍数在300倍，用旋钮调节成像质量至最佳。插入采样管，在视频显示屏上观察样本。

3.6.1 预估精子数量（根据不同情况，需要在4.1.2选择相应样本类型进行测量）：

①精子数量较多，视频观察样本中杂质/圆细胞小于50%，样本类型选择FRESH进行检测。

②精子数量较多，视频观察样本中杂质/圆细胞超过50%，将该样本洗涤后选择WASHED进行检测。

③ 疑似无精与少弱精样本：

• 当精子数目少无需精确计数时，样本类型选择FRESH进行检测，得到部分测量结果(对应《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验手册》第2.10节)；

• 当精子数目少需要准确计数时，样本类型选择POSTVASECTOMY模式进行检测，得到活动精子、不活动精子和总精子数目。（对应《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验手册》第2.11节）。

3.6.2测量白细胞，测量方法可分为以下两种情况（根据测量值在4.1.2做出相应选择）：

①用户已采购MES官方WBC试纸条，请根据说明书测量WBC浓度（亦可测量PH值）。

②用户未采购MES官方WBC试纸条，在视频显示屏观察到相邻两方格内均有白细胞，则WBCCONC. >1M/mL；若白细胞不在相邻方格出现，则WBCCONC. <=1M/mL。

③ 也可根据《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验手册》第2.12进行白细胞计数。

4. 全自动光电检测

4.1输入病人和样本信息：

4.1.1按操作屏提示输入：受检者ID、出生日期、禁欲天数、样本号、采集时间、接收时间。

4.1.2按操作屏提示和样本情况：选择样本类型（选择依据参考3.6.1），输入样本体积，选择白细胞浓度（选择依据参考3.6.2），输入PH值，选择外观、液化和黏性是否正常。

4.1.3根据3.5取样情况和操作屏显示，在>=0.5mL?下面选择YES/NO：

①样本量大于等于0.5mL，能吸满采样管的正常量样本（3.5.1）选择YES

②仅充满采样管前端薄片区域的少量样本选择NO>LOW VOLUME-20 MICROLITERS ONLY

③1:1稀释后能吸满采样管的样本选择NO>DILUTE SEMEN 1:2(1+1) WITH MEDIA

4.2自动检测：信息输入、选择完成后。等屏幕出现ISERT CAPILLARY INTO CHAMBER提示，再把待测采样管插入仪器自动测量仓。

注意：检测过程中有进度条提示，期间切勿触碰仪器和采样管！

4.3显示结果：进度条走完后显示测量结果（结果共2页），按SQA-V键盘上的Enter键翻页。

4.4结果传输：按Enter键，使SQA-V下显示屏进入“IMPORTTEST”界面，在电脑的V-sperm软件上点击“ImportTest”按钮，将测量数据导入电脑。

4.5图像采集：利用V-Sperm对样本进行图像采集，生成图文报告。

根据不同的中文报告系统有三种情况：

①瑞美单机中文报告系统：点击“重启接口”>选择“标本日期”>点击“读取数据”>选择病人>更改资料（如有必要）>预览打印。

② LIS系统：LIS厂商不同操作方式不同，具体操作请联系LIS工程师。

③V-Sperm系统：目前V-Sperm只能打印英文报告，中文报告正在建设中。

5. 外部质控

建议用户在每天开始检测样本之前，先运行质控。MES专门为SQA-V精子质量分析仪研制了标定质控品QwikCheckTM质控珠，用户也可用CAP稳定精子作为外部质控品。

①MES官方QwikCheckTM质控珠：【QwikCheckTM质控珠的设置和检测方法请参阅附录9】

②CAP稳定精子：【CAP稳定精子质控检测方法请参阅附录10】

附录1光电测量仓检查和清洁指导

说明：光电测量仓是仪器检测的关键部分，其清洁度影响测量结果的准确度，光电测量仓的清洁度由自检参数体现。当某些参数超过可接受范围时，测量结果会有偏差甚至造成仪器无法正常启动。为了确保仪器良好运行，需要每天检查仪器自检参数，按时用正确方法对光电测量仓进行清洁。

清洁前准备：

• 开机自检失败时（若检测样本过程中自检失败需重启SQA-V），在SQA-V上选择SERVICE > SERVICE DATA进入19个参数界面仪器下屏幕示“FAILED SELF-TEST”此时在SQA-V键盘上按SERVICE键进入SERVICE DATA 19个参数界面）。

• 在V-Sperm软件上，选择Utilities > Self-Test Data > Continue进入自检参数显示界面。

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何时需要清洁：每日清洁（见步骤 1），每周清洁（见步骤 2） word/media/image3.gif

或者发生以下情况时：

• 当仪器自检失败或发生其他故障时

• 当仪器被精液样本污染

清洁套装组成：

• 长柄清洁刷

• 超纤清洁片(一次性使用）

• 海绵干燥片(一次性使用）

• 清洁液 （每次仅使用“1”滴）

请注意：清洁片与干燥片为一次性使用，不可重复使用！

清洁方法：步骤1（每日）

1. 将长柄清洁刷（刷毛朝下）沿着光电测量仓上边缘插入底,与插入精子采样管完全相同（见图 2）。

2. word/media/image4.gif向下轻压同时朝外拉动清洁刷同时向下轻压擦拭光学组件（拉动时会有碰到“阶梯”的感觉，见图 3）。

3. 同时观察电脑V-Sperm上的自检参数“REF.2”的值，把REF.2的值清洁到2500-3500mV内，尽可能接近3000mV。

清洁方法： 步骤 2（每周）

1. 取出一片超纤清洁片（见图4）。

- 仅将1滴清洁液滴在清洁片前端（图4圆圈内）。

- 甩一下，甩掉多余的液体。

- 插入测量仓，超纤面层朝下（见图5）。

- 拔出后再次插入，来回擦拭3-5次。

word/media/image5.gifword/media/image6.gif

2. 将海绵干燥片插入测量仓，静置 10-15 秒钟（见图 6）。

注意：海绵干燥片插入光电测量仓后，切忌前后移动。

3. 同时观察电脑V-Sperm上的自检参数“REF.1”的值，把REF.1的值清洁到150-350mV内，尽可能接近200mV。

4. 重启仪器，如果自检失败。再次查看自检参数，看AMPLITUDE是否在50-100mV之间，尽可能接近70mV。若不在，重复清洁步骤2（AMPLITUDE值不实时显示，重启仪器后更新显示）。

SQA-V精子质量分析仪光电全自动测量仓必须使用以色列MES公司生产的专用清洁套装进行清洁!!!

附录2添加测试数

步骤：

附录3可视化系统调节

说明：SQA-V可视化系统配合上方视频显示屏可以用来观察精子和计数精子细胞。可视化系统是V-Sperm的重要组成部分，通过V-Sperm可以在电脑上显示实时视频图像，可以保存视频图像，也可以保存图片生成图文报告。通过调节可视化系统可以得到更加清晰的视频效果。

调节方法：

1.SQA-V开启后视屏显示屏会自动点亮，等待自检完成（系统自检过程中不可操作仪器）。

2.按数次HIGH（高）ILLUMINATION（照度）键确保将亮度设置到最高等级；

将亮度、对比度和颜色旋钮逆时针方向调至最大；

将焦距旋钮顺时针旋到底；按ZOOMOUT将放大倍数调至最小（300倍）。

3.将采样管（最好是吸有样本的采样管）插入可视化测量仓里。

4.将亮度旋钮顺时针调整之视频显示屏刚刚开始发亮。

5.逆时针调整焦距旋钮直至图像聚焦最清晰。

6.调整对比度、颜色、亮度，如有必要再次旋转焦距旋钮使视频显示效果达到最佳。

旋钮和按键：word/media/image14.gifword/media/image15.gifword/media/image16.gifword/media/image17.gifword/media/image20.gifword/media/image21.gifword/media/image22.gifword/media/image23.gifword/media/image24.gif

附录4样本液化延迟处理方法

说明：对于超过60分钟仍不液化的样本需要进行液化处理，MES有专门的液化剂。在没有MES液化剂的情况下，可按照《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验室手册》提供的处理方法处理液化延迟的样本。

一、 MES官方QwikCheckTM液化剂

QwikCheckTM液化剂用来促进和加速采集30分钟后依然很黏的精液样本的液化。高粘度会影响运动和浓度和抗体涂层的精确测量。QwikCheckTM液化剂用来为全自动或手动分析高粘度样本做准备，仅用于体外。

试剂盒包含

∙ 20单剂量，5毫克的小瓶冻干α-胰凝乳蛋白酶。

∙ 产品说明书。

稳定性和储存条件

∙ 保质期一年。注意包装上的有效期。

∙ 试剂瓶常温保存。

使用说明

1. 选择一小瓶α-胰凝乳蛋白酶。

2. 开瓶前轻拍瓶子使里面的东西移到底部。

3. 将瓶内的物体全部加到样本中

4. 轻轻混合样本使粉状物体溶解。

5. 样品一旦液化（5-10分钟），立即加入人体血清白蛋白（HSA）（本试剂盒不提供）进行自动化检测或中和酶活性（可选）。

临床表现：液化精液样本：

预防措施和警告

本试剂包含α-胰凝乳蛋白酶、蛋白酶。该蛋白酶可能会刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。如接触眼睛，立即用大量水冲洗并就医。处理产品时请遵守下列注意事项：

-穿戴适当的防护服：口罩，手套和实验室外套。

-避免材料分散在工作区。

参考文献

WHO实验室手册的精液和子宫颈粘液相互作用的检查，第五版，剑桥大学出版社，2010

二、 节选自《世界卫生组织第五版：人类精液检查与处理实验室手册》液化处理方法如下：

2.3.1.1　液化延迟

有时候精液可能不液化，这使得精液评估变得困难。在这种情况下，需要另行处理，机械混匀或酶消化可能是必要的。

1.一些标本通过加入等体积的生理培养液（如Dulbecco磷酸缓冲盐水，见A4.2 节），并且用加样器反复吹打，可使其液化。

2.精液反复（6～10 次）缓慢地通过接在注射器上的18 号钝性针头（内径0.84mm）或19 号针头（内径0.69mm），可降低精液的非均匀状态。

3.应用一种广谱蛋白水解酶（EC 3.4.22.32）菠萝蛋白酶消化，有助于促使精液液化（方框2-2）。

A4.2Dulbecco’s磷酸盐缓冲液

1. Dulbecco’s 葡萄糖-PBS：将0.2g 氯化钾（KCl），0.2g 磷酸二氢钾（KH2PO4），0.1g氯化镁（MgCl2·6H2O），8.0g 氯化钠（NaCl），2.16g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和1.00g D- 葡萄糖加入到750ml 纯净水中。

2.将0.132g 氯化钙（CaCl2·2H2O）溶于10ml 纯净水中，边搅拌边缓慢加入上述溶液中。

3.用1mol/L NaOH调节pH 至7.4。用纯净水定容至1000ml。

附录5多杂质样本洗涤处理

说明：精液样本里的圆细胞/杂质超过50%或更高时，可能会影响SQA-V精子浓度的计算。如果SQA-V自动测量的精子浓度值比预期/视频观察的估值高很多，并且自动测量的精子活力值远低于预期/视频观察的值，此时需要对样本进行洗涤处理。

洗涤方法：

1.充分混匀样本，取其中的1mL

2.配合0.9%（9g/l）的生理盐水稀释到10 mL

3.使用离心机选择800g量离心10分钟

4.垂直放置试管只取1毫升上层清夜

5.使用吸管通过反复的移液，使上清中精子细胞重新悬浮于样本中

注意：当完成上述操作后，绝大多数抗精子抗体和精浆中其他负面的或与精子细胞相互制约的成分基本被移除，同时精浆原液由加入的洗涤液取代。

附录6 一次性专用精子采样管说明书

【产品名称】一次性专用镜子采样管。

【材料】聚苯乙烯，医用级橡胶。

【包装规格】纸盒，50支/盒，I-button卡1张（用于向精子质量分析仪添加测试许可数）。

word/media/image27.gif【组成结构】word/media/image26.gif

隔离阀支架

【产品用途】用于从盛放精液的容器中采集样本，配合同厂精子质量分析仪进行检测。

【使用方法】

word/media/image28.gif步骤1：样本采集

1.常规样本（精液体积不少于0.5mL）：

1）先将精子采样管活塞推到底。仅将采样管头部薄片区域插入样品

底部（见图1）。

2) 将两根手指夹住吸管活塞，向后慢慢拉动活塞，确保吸头始终位于精液样本

液面下方，以及表面气泡下方（见图1、图2）。样本吸入应当超过采样管

鲁尔接头处。

3）确保样本完全充满采样管活力及浓度测量区，采样管前端不得出现空隙（见word/media/image33.gifword/media/image34.gif

图2）。轻弹采样管吸管，确认无气泡。如

果轻弹采样管吸管后，发现测量区里有气泡，

可通过吸入更多精液样本，将气泡吸至采样

管后部吸管区域。

4）快速充分擦拭精子采样管头部测量区外表面

（见图3），去除附着在采样管外表面的精液word/media/image35.gif

样本，避免污染SQA-V全自动测量仓及视频

仓。若擦拭后，采样管头处出现空隙，可以轻

推活塞向测量区注入更多样本。

5）按下蓝色隔离阀，直至精子采样管完全闭合（见图4）。word/media/image36.gif

2.低量样本（精液体积小于0.5mL）：

1）先将精子采样管活塞推到底。仅将采样管头部薄片区域插入样品底部（见图1）。

2）向后缓缓拉动活塞，不要将采样管从样品中拔出。吸出20微升精液样本仅充满采样管前端薄片区域即可（见图1）。吸入样本直至样本出现在采样管方形测量区，始终保持吸头置于样本液面下方，以及表面气泡下方。取出采样管，观察并确认薄片测量区完全充满精液样本（无空隙）。

3）分擦拭精子采样管测量区外表面，包括上表面和底部。完全擦除采样管外表面附着的精液样word/media/image37.gif

本，避免污染SQA-V精子质量分析仪光学测量仓。观察并确认前段薄片区域完全充满精液

样本。如果擦拭后采样管吸头处出现空隙，需向前轻轻推活塞直至采样管顶端有一滴精液溢

出，然后再次从盛放精液样本的容器中吸入样本。

4）此时必须移除隔离阀。拔下拔下精子采样管吸管，用吸管头部插入隔离阀下方将隔离阀顶出

（见图5）,取出隔离阀（见图6）。现在可以将采样管插入精子质量分析仪进行检测。

5）注意：低量样本应在样本吸入精子采样管后立即进行测量。word/media/image38.gif

步骤2：上机检测word/media/image39.gifword/media/image40.gif

1）将精子采样管插入精子分析仪全自动测量仓时，蓝色隔离阀应当朝

下，将采样管插到底，确保采样管位于正确的测量位置。

2）将精子采样管精子质量分析仪视频仓时，蓝色隔离阀应当朝上，将

采样管插到底，然后开始进行检测。

【注意事项】

1. 本产品仅限一次性使用，重复使用，检测结果无效。

2. 精液样本无需进行加热，室温下即可直接进行检测。

3. 检测前，精液样本需完全液化并充分混匀。

4. 避免使用震动方式或用吸管搅匀样本，应缓慢旋转盛放精液的容器，避免产生气泡，导致不准确的测量结果。

5. 高粘度精液样本可使用本公司生产的QwikCheck™液化剂，使样本快速有效液化。

6. 由于精液是具有生物危险的物质，因此：

操作人员应当穿戴实验室防护服，口罩和手套。

精液样品的处理和处置应当使用标记生物废品的容器盛放。

采样管一经使用应按照实验室生物危险品管理规范进行处置。

只有经过精液等生物危险品培训的人员才可以进行检测和样本处理。

【贮 存】常温，干燥，清洁处存放。

附录7 POSTVASECTOMY检测模式

说明：POSTVASECTOMY检测模式主要是检测精子数量极少的样本。SQA-V通过5分钟的高敏感度扫描，检测样本中的精子数量。为了取得理想的检测精度，请严格按照厂家提供的检测流程进行操作。

在输入信息时，样本类型选择“POSTVASECTOMY”，采样管吸取样本的方法与吸取正常样本相同。

注意：

1. 如果Post-vasectomy模式下的结果需要以M/mL为单位生成报告：

单位换算示例（假设样本体积为2mL）如下：

MOTILE 0.40 M / Volume (2 ml) = 0.20 M/ml

IMMOTILE 1.00 M / Volume (2 ml) = 0.50 M/ml

TOTAL 1.40 M / Volume (2 ml) = 0.70 M/ml

2. POSTVASECTOMY检测模式检测的结果，Lis系统或瑞美单机报告系统接收不到，需要手动输入到报告系统中。

附录8图像采集方法

说明：SQA-V可视化系统配合显示器用来观察和计数精子，通过V-Sperm可以在计算机上显示更清楚的即时视频，也可以用V-Sperm软件保存图像生成图文检测报告。

准备：自动检测完成后，把精子采样管从下方光电测量仓拿出插到上方的视频仓中，调节可视化系统使视频质量最佳。

图像采集方法：

注意：在完成图像采集的五个步骤后，图像成功添加。接下来可以传输到不同的报告发布平台打印出图文报告。

附录9 QwikCheckTM质控珠的设置和检测方法

说明：不同批次的QwikCheckTM质控珠标定浓度可能不同，每拿到一份新的质控品，必须先通过V-Sperm软件对SQA-V的质控参数进行设置或更新。

设置方法使用方法如下：

附录10CAP质控品的设置和检测方法

说明：CAP的质控品作为稳定精子先在质控模式下运行一次。如果质控结果为0，则在TestNewPatient下测试，样本类型选择“Fresh”。

质控信息设置：

• 在SQA-V MAIN MENU界面依次选择SERVICE > SERVICE DATA。

• 在电脑V-Sperm软件上依次选择Set-up> SQA-V，然后点击“Continue”，出现设置界面。

• 在Control Media处选择“Stabilized Sperm”，Level 1和Level 2的信息按如下填写：

 Lot #：CAP样本号

 TargetValue：50

 +/-Range：50

 Exp. Date：当天日期

• 点击“Apply”，等待信息写入SQA-V。

• 提示：在CAP质控品测试完成后，再把质控信息设置成LatexBeads！

在SQA-V上运行CAP样本：

1. 在SQA-V MAINMENU界面依次选择RUNCONTRLOS>LEVEL #1，按Enter键，等待仪器自检。

2. 用移液器反复吹打样本10次，使样本混合均匀。注意不要产生气泡！

3. 用一次性精子采样管吸取样本，确认没有气泡后按下蓝色隔离阀，擦拭采样管头部外表面。

4. 当仪器下屏幕提示插入采样管时，把吸满CAP样本的采样管插入到下方光电测量仓。

5. 如果检测结果为0，按下面的步骤在“FRESH”模式下重新检测。

6. 在SQA-V MAINMENU选择TESTNEWPATIENT，第一个界面输入以下信息（其余信息可以跳过）：

 PATIENTID：CAP样本号。

 BIRTHDATE：当天日期

7. 下一个界面选择以下信息（其余信息可以跳过）：

 SAMPLETYPE：FRESH

 WBCCONC.：＜1M/mL

8. 在屏幕提示“IS SAMPLE VOLUME SUFFICIENT FOR COMPLETE RETESTING ≥ 0.5mL？”时，选择“YES”。

9. 等待系统自检，当提示插入采样管时把刚才吸满CAP样本的采样管插入到下方光电测量仓。

10. 记录自动检测的结果。

11. 重复步骤1-10，测试第二个等级的样本。

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/4af7c106178884868762caaedd3383c4ba4cb43f.html