BeijingTel ：86-10-59822688 Fax ：86-10-59822788 Shanghai Tel ：86-21-38653846Technical ：86-10-59822661/2665 Consult ：800-990-6057 Fax ：86-21-64074836 E-mail ：people@tiangen.com E-mail ：sh@tiangen.com 血液基因组提取注意事项（DP319） 样本保存及预处理：1. 血液样本通常保存在-20℃或-80℃低温保存，如果放置4℃建议不超过一个星期。哺乳动物的红细胞里是没有细胞核的，所以首先要把红细胞裂解掉，然后再裂解白细胞提取基因组DNA ，一般采用100ul 以上的血液进行提取。2. 血液的抗凝剂的选择：如果是用来做分子生物学实验的血液最好采用EDTA 、枸橼酸钠（也叫柠檬酸钠），尽量不要采用肝素。3. 冷冻的血液取出后37度速溶能有效避免DNA 在血液融化过程中的降解。 DNA 提取过程1. 细胞裂解时要注意样本量和裂解溶液的量想匹配，确保样本充分裂解。如需两次CL 裂解，则最好第一次加入的CL 的量多一些。例如600ul 血液一共加入1.5ml 的裂解液CL ，分两次建议第一次800ul 裂解液CL ，第二次700ul 裂解液CL 。2. 加入裂解液CL 后要保证充分混匀。离心后沉淀应为淡粉色或白色沉淀。如果沉淀颜色较红，则需再加入裂解液CL 进行裂解。3. FG 和蛋白酶K 的混合液最好现用现配，样本加入该混合液后立即涡旋至无团块。4. 水浴时期间适当混匀样本，以助于裂解。5. DNA 使用异丙醇进行沉淀，常温的异丙醇即可，但冰冷的异丙醇更有助于DNA 的沉淀。6. 溶液法的洗涤方式是使用70%的乙醇对沉淀洗涤，这里要注意加入乙醇后不是简单晃晃就行，要让那个DNA 沉淀片漂浮在70%乙醇中，然后轻柔颠倒，这样才能充分对DNA 沉淀进行洗涤。洗涤后离心去除乙醇，然后晾干 DNA ，这里所说的晾干是指将乙醇挥发干净，而不是将水也弄干。如果核酸太干燥会很难溶解。7. 紫外分光光度法是大家都熟悉的，如果我们使用的nanodrop 这种微量测定的就最简单了，加入1、2ul DNA 原液就可以测值了。但现在很多实验室还是用传统的仪器，需要50-100ul 的溶液才可以测定，这样就需要将DNA 进行稀释然后测定。通常将离心柱法的稀释4-5倍，溶液法得到的DNA 稀释40-50倍。具体稀释多少倍要根据实验得到的DNA 而定，即稀释后的DNA 测OD260的值在0.1-1之间。纯度的公式为OD(260-320)/OD(280-320)，这里列出的是260-320比上280-320，其中OD320是溶液背景值，这样计算的比值更准确的衡量DNA 的纯度。浓度的计算是OD260的值乘以50ng/ul ，得率的话就再乘以稀释倍数。8. 电泳检测核酸大家就更熟悉了，取2-5ul DNA 在0.7-1%的琼脂糖胶上电泳，观察电泳条带。高质量的DNA 的电泳条带应该是清晰锐利的。如果出现拖尾现象，会考虑是基因组部分降解；如果加样孔里有很明亮的带，通常是蛋白污染。通过这两种方法我们就可以判断得到的DNA 的质量是否满足我们下游的实验。
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