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石蜡切片详细步骤
石蜡切片详细步骤
发布时间:2011-09-18 来源:
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石蜡切片
1.
仪器
石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻
片、盖玻片等。
2.
试剂
FAA
固定液
(70%
酒精
90ml
、冰醋酸
5ml
、福尔马林
5ml
、
10%
番红水溶液、
0.5%
固绿
(用
95%
的酒精配制)
、酒精(
100%
、
95%
、
80%
、
70%
、
50%
)
、二甲苯、蒸馏水、甘油、中
性树胶等。
3.
取材
幼嫩的油菜植株叶片和茎
4.
方法与步骤
(
参照
1
.固定:
FAA
固定液固定
48
小时以上。
2
.脱水:
50%
酒精→
70%
酒精→
83%
酒精→
95%
酒精→
100%
酒精→
100%
酒精。
每级
2h
。
100%
酒精中
1.5h
。其中
70%
酒精处可长期保存。
3
.透明:
1/2
二甲苯
+1/2
无水乙醇
(2h
→纯二甲苯
(1.5h
→纯二甲苯
(1.5h
4
.浸蜡:
将处理的材料置于
1/2
石蜡
(
固体粉末状
+1/2
二甲苯中,
40
℃烘箱敞口过夜。
5
.包埋:
先提升恒温箱的温度至
60
℃,换纯蜡
3
次,每次
1-2h
,用硬的电光纸、牛皮纸叠纸
盒,置于
45-60
℃的烫板上,倒入材料,摆放好材料,把标签(正面向外置于底部)
,补足
石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出
晾干,也可在凉水盆中放置过夜。
6
.切片
对包埋的材料进行修块、粘块、整修后,保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。
切面的上、下边平行。用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑,并迅速将石蜡块四周的碎屑烫
平,使石蜡块牢固地粘在台木上。检查切片机,安装切片刀、调整好刀的角度,调整石蜡
块与刀口之间的角度与位置后开始切片。
7
.粘片
将粘贴剂置簿玻片上,再取切片浮置粘片剂上,然后置烘片台上,使切片展开烫平,
材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好,用滤纸吸去多余水分,同时以记号笔在玻片上
编号,放入温箱中烘干,温度
30
~
40
℃中过夜。
8
.脱蜡
脱蜡用二甲苯,把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中:纯二甲苯
(10-20min
→纯二
甲苯
(5-10min
9
.染色
将纯二甲苯脱蜡完全的材料,
1/2
二甲苯十
1/2
纯酒精→
100%
酒精→
95
%酒精→
85
%
酒精→
70
%酒精→
50
%酒精→
1%
番红染色
(4h
以上
→
50
%酒精→
70
%酒精→
85
%酒精→
95
%酒精→
0.5%
固绿
(1min
→
95
%酒精→
100%
酒精→
100
%酒精
(
未注明时间各级均为
3min
10
.胶封
滴加加拿大树胶封藏。
11.
镜检,拍照
本文来源:
https://www.2haoxitong.net/k/doc/10d5098a680203d8ce2f2430.html
《石蜡切片详细步骤.doc》
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