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猪脂肪细胞膜单克隆抗体的制备

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山东农业科学　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２００２年　第４期　
猪脂肪细胞膜单克隆抗体的制备　
钱凤芹，庄文忠，任红梅，李爱芹　
（山东省农业科学院高新技术研究中心，山东济南
２５ｏ￣ｏｏ）　
摘要：利用分离纯化的猪脂肪细胞膜蛋白在福氏完全佐剂中乳化，经皮下（腹膜内）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。　
取脾细胞与ｓＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞进行融合，经筛选及克隆，成功地建立了４株可分泌抗猪脂肪细胞膜蛋白单克　
隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞２Ｄ３、２Ｄ４、３Ｆ６、３Ｅ７，其中以３Ｅ７稳定性最好，血清抗体效价为ｌ０３，此杂交瘤细胞株　传代培养２～３个月以上，ＥＬＩＳＡ检测抗体滴度无明显降低。　
关键词：单克隆抗体；细胞融合；筛选；扩大培养　中图分类号：￥８５２．４　３　
文献标识号：Ａ　
文章编号：１００１—４９４２（２００２）０４—００４１—０２　
为了在满足动物营养需要和有效控制疫病的　基础上进一步提高动物生产体系的经济效益，满　足市场不断变化的需求，人们一直探索和发展新　
的促进动物生产和提高胴体品质的技术手段。类　
１．３猪脂肪细胞膜蛋白抗原的制备　
将体重７０～９０ｋｇ的猪屠宰后，取其后腹膜皮　
下新鲜脂肪，剪碎后加入适量细胞裂解液，其细胞　裂解液的组成：９．５ｍｌ　ＰＢＳ（０．０１ｍｏｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４、　０．１５ｍｏｌＮａＣ１，ｐＨ７．４）、０．１ｍｌ　１０％ＳＤＳ和４％ＴｒｉｔｏｎＸ　
一
固醇、生长激素和类激素物质等虽具有显著的促　生长、减少动物体内脂肪沉积及增加肌肉组织生　长的作用，但它们在畜产品中的残留直接威胁人　类健康，这就迫使人们把目光转向那些较易被消　费者接受的非激素技术途径。脂肪细胞膜免疫是　
解决动物体脂肪过量沉积，促进动物生长的高效、　
１００，３７ｏＣ振荡３～４ｈ后，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心５ｍｉｎ　
取上清液。分光光度计测定脂肪处理液的蛋白质　浓度为２１．８３ｍｇ／ｍｌ，用ＰＢＳ稀释至１～２ｍ　ｒｎｌ，分　装到Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管，每管ｌｍｌ，一８０℃保存备用。　
１．４小鼠免疫　
安全的技术手段。它使用的是动物的“天然产品”　（抗体），而不是激素或其它类似物等外源物质，对　解决药物残留，增进人类身体健康具有广阔的应　用前景。本研究在分离纯化猪脂肪细胞膜蛋白的　基础上，建立分泌抗猪脂肪细胞膜蛋白的单克隆　抗体的杂交瘤细胞株，从而为单克隆抗体的应用　
打下良好的基础。　
取上述猪脂肪细胞膜蛋白抗原免疫６～８周　龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，抗原用福氏完全佐剂充分乳化，　
通过腹部皮下多点注射，２ｏｏｔ，＿ｇ／只，２周后用相同　
的剂量和注射方法加强免疫，再过２周用不含佐　
剂的纯化抗原直接腹腔注射进行最后１次加强免　
疫，４ｏｏｔ￣，／只，末免后第３天取脾脏。　
１．５阳性杂交瘤细胞株的建立　
１．５．１　骨髓瘤细胞的制备　在杂交瘤细胞融合　前４８ｈ，用含１０％小牛血清的１６４０培养液将供融　合的骨髓瘤细胞进行增殖培养，使细胞浓度在融　合当天达到对数生长期时的ｌｏ５个细胞／ｍｌ，取数　瓶骨髓瘤细胞，轻轻倒去瓶内原有的培养液，加入　无血清的１６４０培养液少许，用毛细吸管吹打瓶壁　数次，将细胞洗下，一并收入离心管中，悬于无血　清的１６４０培养液中轻轻混匀，细胞悬液以１５００ｒ／　ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ，倾去上清液，洗涤２次，然后悬于　无血清的１６４０培养液中，吸出少量培养液进行细　
１材料与方法　
１．１材料　
新鲜猪脂肪由山东省农科院实验猪场提供。　ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠购自中国农业大学动物医学院。　
１．２主要试剂　
ＳＤＳ（十二烷基硫酸钠）、ＴｒｉｔｏｎＸ一１００、福氏完　全佐剂、ＰＥ０　０（聚乙二醇）、ＲＰＭＩ一１６４０培养　基、ＨＡＴ培养基、ＨＴ培养基等均购自上海生工生　
物技术服务有限公司。　
收稿日期：２ＯＯｌ一１２—２６；修回日期：２００２—０６—１２　
＊本文属山东省科技厅项目“分子控制猪、鸡胚胎形成的研究”的部分内容。　
４１　

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/e7074239866fb84ae45c8da4.html