大肠菌群及检验

一、大肠菌群介绍

　　大肠菌群并非细菌学分类命名，而就是卫生细菌领域得用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指得就是具有某些特性得一组与粪便污染有关得细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气得革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌与阴沟肠杆菌等。

　　大肠菌群分布较广，在温血动物粪便与自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动得场所以及有粪便污染得地方，人、畜粪便对外界环境得污染就是大肠菌群在自然界存在得主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其她型别较多。

　　大肠菌群就是作为粪便污染指标菌提出来得，主要就是以该菌群得检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数得高低，表明了粪便污染得程度，也反映了对人体健康危害性得大小。粪便就是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者得粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染得可能性，潜伏着食物中毒与流行病得威胁，必须瞧作对人体健康具有潜在得危险性。

　　大肠菌群就是评价食品卫生质量得重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。

二、大肠菌群检验方法：

　　由于大肠菌群指得就是具有某些特性得一组与粪便污染有关得细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气得革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群得检测一般都就是按照它得定义进行。

　　目前国内采用得进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准与原国家商检局制订得行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。

（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养与证实试验。

　　乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察就是否产气。

　　分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。

　　证实试验：挑取平板上得可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。

　　报告：根据证实为大肠杆菌阳性得管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群得MPN值。

　　具体操作参见GB4789、3-94 《中华人民共与国国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》

（二）原国家商检局制订得行业标准，等效采用美国FDA得标准方法，用于对出口食品中得大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：

　　推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察就是否产气。

　　证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察就是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群得MPN值。

　　具体操作参见 SN0169-92 《中华人民共与国进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群与大肠杆菌检验方法》

三、说明：

1．MPN检索表：

　　MPN 为最大可能数(Most Probable Number)得简称。这种方法，对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定得反应呈阳性管数得出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似得数值。

　　MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同得稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。注意国家标准与行业标准中所附MPN表所用稀释度就是不同得，而且结果报告单位也不相同。

2．初发酵与证实试验：

　　无论就是国家标准得三步法还就是行业标准得两步法，都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验，培养基得配制略有不同，但都就是为了证实培养物就是否符合大肠菌群得定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。

　　初发酵阳性管，不能肯定就就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤得符合率，初发酵与证实试验相差较大。因此，在实际检测工作中，证实试验就是必需得。

3．产气量与倒管：

　　在乳糖发酵试验工作中，经常可以瞧到在发酵倒管内极微少得气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮得小气泡。实验表明，大肠菌群得产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小得气泡。如果对产酸但未产气得乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。

4．挑选菌落：

　　国家标准中，需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离，对典型与可疑菌落进行观察与证实试验。由于大肠菌群就是一群细菌得总称，在平板大肠菌群菌落得色泽、形态等方面较大肠菌更为复杂与多样，而且与大肠菌群得检出率密切相关。国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时，检出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。

　　另外，挑取菌落数与大肠菌群得检出率有密切关系，只挑取一个菌落，由于机率问题，尤其当菌落不典型时，很难避免假阴性得出现。所以挑菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。

5．抑菌剂：

　　大肠菌群检验中常用得抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂得主要作用就是抑制其它杂菌，特别就是革兰氏阳性菌得生长。

　　国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，行业标准中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿与胆盐作为抑菌剂。

　　抑菌剂虽可抑制样品中得一些杂菌，而有利于大肠菌群细菌得生长与挑选，但对大肠菌群中得某些菌株有时也产生一些抑制作用。有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因此抑菌剂得添加应严格按照标准方法进行。

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/e1cb9e2cf7335a8102d276a20029bd64793e627f.html