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兔白细胞介素6IL6酶联免疫分析

发布时间：2023-02-15 10:09:23 来源：文档文库

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兔白细胞介素6(IL-6酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：5ng/L-160ng/L使用目的：
96T
本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素6(IL-6含量。实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔白细胞介素6(IL-6水平。用纯化的兔白细胞介素6(IL-6抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6(IL-6，再与HRP标记的白细胞介素6(IL-6抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素6(IL-6呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔白细胞介素6(IL-6浓度。试剂盒组成1
30倍浓缩洗涤液2酶标试剂3酶标包被板4样品稀释液5显色剂A液6显色剂B液标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。160ng/L80ng/L40ng/L20ng/L10ng/L
5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品
150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶
789
终止液
标准品（320ng/L）标准品稀释液
6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2张1个
10说明书11封板膜12密封袋
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，

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然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。6.7.8.9.
加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/cada18445beef8c75fbfc77da26925c52dc59140.html