桉树( Eucalyp tus spp ) 又名有加利、桃金娘(Myrtaceae)科桉属植物,原产于澳大利亚及附近岛屿,是世界3大速生树种之一,为常绿乔木,树冠形状呈尖塔形、多枝形和垂枝形等形状。喜光,好湿,耐旱,抗热,具有适应性强、生长快,速生丰产性能好、产量高、周期短等优点。树种多达945种,分布跨度大,表现差异大,迄今为止,已有120多个国家和地区先后引种了不同品种的桉树,我国于1890年开始引入,现已广泛分布于南方各省。桉树叶可提炼挥发油,广泛用于香料调味业、香水业、化妆品业、医药化工原料等,具有镇痛、解热、平喘等功效,并且精油还有杀菌，抗虫等作用。
实验部分：
一：精油提取
本实验对桉树、樟树植物精油的提取采用水蒸气蒸馏法从采集的新鲜桉树枝叶和樟树枝叶中提取桉树油。
1、实验材料和仪器
仪器：磨碎机、水上蒸馏塔（自制）（原因是原来的水蒸气蒸馏法，是将枝叶浸在水中蒸出的水蒸气太多，导致出油率降低）冷凝管、索氏提取器、梨型漏斗、锥形瓶
材料：新鲜的桉树、樟树枝叶。
自制水上蒸馏塔：图解
2、实验流程：
桉树（樟树）枝叶→洗净→磨碎 装料→水上蒸馏塔
↓
（供做研究材料）装瓶←精油←分层分离←冷凝回流←隔水蒸馏
提取研究内容：研究不同液料比对出油率的影响和浸泡时间对出油率的影响。
实验设计：
（1）液料比：称取准确称取40g枝叶, 浸泡2h, 分别在液料比为1∶8、1∶10、1∶12、1∶14、1∶16时（还可设置不同梯度）, 蒸馏1h, 以研究液料比对桉树（樟树）草精油出油率的影响。
（2）浸泡时间：准确称取40g枝叶, 按照1∶12的液料比, 分别浸泡0、2h、4h、6h、8h, 提取1h, 以研究浸泡时间对桉树（樟树）精油出油率的影响。
（3）蒸馏时间：在测出最佳液料比和浸泡时间后准确称取40g鲜花, 按照1∶12的液料比, 浸泡2h,分别蒸馏0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h,以研究蒸馏时间对桉树（樟树）精油出油率的影响。
二、精油抗菌性研究
（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、青霉、黑曲霉、黄曲霉）等对食品卫生、临床医学和生物材料具有严重的危害和影响。随着人们生活水平不断提高和对健康的日益关注，对防腐剂等食品添加剂在安全性上提出了更高的要求，用天然防腐剂代替化学合成防腐剂已成为发展趋势；由于抗生素的滥用造成了很多微生物产生了抗药性，临床上急需寻找新的抗菌药源。因此，本实验就枫香叶精油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、青霉、黄曲霉的抑制作用进行了研究，旨在为寻找一种新的抗菌药源和有效且安全的食品天然防腐剂，也为枫香资源的综合开发利用提供一些有益的参考。
用滤纸片法测定精油的抑菌活性，用平板涂布法测定其最低抑菌浓度(MIC)，
1、仪器与设备和药品
压力蒸汽灭菌锅、干热灭菌器、
电热恒温培养箱、旋涡混合器、微波炉、超净工作台、
移液器等。青霉素钠 ；酮康唑；TBHQ(叔丁基对苯二酚) ；丙酮。大肠杆菌( E s c h e r i c h i a c o l i ) 、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)；青霉(Penicillium oxalicum ) 、黄曲霉( A s p e r g i l l u sflavus)，。牛肉膏蛋白胨培养基(细菌选用)：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂18g、蒸馏水1000ml、pH7.2～7.4。
马铃薯蔗糖琼脂培养基(霉菌选用)：马铃薯(去皮切块)200g、蔗糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000ml，自然PH值。
2、供试菌悬液的制备
供试菌的制备：在相对应的试管斜面培养基上，细菌在30℃下活化18h，霉菌在27℃下活化48h。（怎么做？）
菌悬液的制备：细菌使用平板计数法，霉菌使用显微镜直接记数法测菌体个数，调至浓度为1 0 6 ～107cells/ml 的菌悬液。
3、实验过程：
（1）抑菌活性测定采用滤纸片法：制直径为6mm 圆形滤纸片，灭菌后备用；将各种待测菌悬液各取0.2ml 在相应的固体培养基上均匀涂抹，制成含菌平板；将滤纸片放入枫香叶精油原液中浸泡2h，取浸泡过滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴滤纸片3 片。用丙酮浸泡的滤纸片做空白对照，用浓度为1mg/ml (稀释剂为蒸馏水)的青霉素钠浸泡的滤纸片作为细菌抑菌对照，用浓度为0.4mg/ml (稀释剂为丙二醇)的酮康唑浸泡的滤纸片作为霉菌抑菌对照。细菌置培养箱中30℃下培养24h，霉菌置培养箱中27℃下培养72h。测量抑菌圈的直径(mm)，做5 次平行实验，结果取均值。
（2）最低抑菌浓度(MIC)的测定采用平板涂布法：将浓度为10% 、5% 、2.5%、1.25% 、0.625% 、0.3125% (溶剂为丙酮)的精油定量地加入到培养基中，充分混合均匀，倒入培养皿，待培养基冷却后，用接种针于各培养基中依次涂供试菌液0.2ml，细菌置培养箱中30℃下培养24h，霉菌置培养箱中27℃下培养72h，观察菌体的生长情况，每个浓度做3 次重复，从无菌生长的培养基中找出提取物浓度最低的培养基，即为该抑菌剂的最低抑菌浓度。
（3）抑菌活性酸碱稳定性实验
用2%的NaOH和50% 的柠檬酸分别将培养基pH值调为4 、5 、6 、7 、8 、9 、1 0 七个梯度，用2 0 % 浓度(溶剂为丙酮)的精油进行抑菌效果测定(方法同（1) ，比较pH 值对精油抑菌活性的影响。
（4）抑菌活性热稳定性实验
将20% 浓度(溶剂为丙酮)的精油分别置于20、40、60、80、100 和121℃下热处理15min，然后按照（1）的方法进行抑菌活性测定。
（5）抑菌活性紫外稳定性实验将20% 浓度的精油(溶剂为丙酮)分别在紫外灯下处理5、1 0、1 5、2 0、25min，然后按照（1）中的方法进行抑菌活性测定。
三、精油抗昆虫性研究
本实验通过用涂抹不同浓度的桉树（樟树）精油的叶片或者昆虫食物喂食昆虫以研究精油的抗虫性。
1、实验仪器和药品：培养皿、胶头滴管、打孔器、市场上买到的大小相近的面包虫等。
2、实验过程：
（1）喂食叶片的制作：采集新鲜菜叶片，用打孔器打直径大约1cm的圆形叶。
（2）测定昆虫的半死亡浓度：，喂食面包虫，观察各个组别（每组20条）的死亡情况，做5次去平均值。确定半死亡浓度。
（3）抗虫性实验：将在市场上买到的大小相近的面包虫喂食一周，在实验之前将面包虫饥饿处理（2-3天），用微量移液枪移取不同量的植物精油配置不同浓度（2ul/l ,4,6,8,12,14,16）的精油溶液，将其涂抹在制作好的喂食叶片上。分别取20条面包虫喂食涂抹不同浓度（在测定半死亡浓度的基础上，）的植物精油（蒸馏水为溶剂）的喂食叶片。以不涂抹任何浓度的喂食叶片作为参照。做五次取平均值，喂食后观察各个组别的虫子表现情况及死亡情况并且记录。在此基础上测定半死亡浓度。
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/c2d3ecf6cc1755270622081a.html
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