中国药典2015年版0521气相色谱法除另有规定外，分离度应大于2.0。3.测定法(1)分子量测定法一般适用于蛋白质和多肽的分子量测定。按各品种项下规定的方法，选用与供试品分子大小相适宜的色谱柱和适宜分子量范围的标准物质，除另有规定外，标准物质与供试品均需使用二硫苏糖醇（D T T)和十二烷基硫酸钠（S D S)处理，以打开分¥内和分子间的二硫键，并使分子的构型与构象趋于一致，经处理的蛋白质和多肽分子通常以线性形式分离，以标准物质分子量(M w)的对数值对相应的保留时间（化）制得标准曲线的线性回归方程lgMw+，供试品以保留时间由标准曲线回归方程计算其分子量或亚基的分子量。(2)生物大分子聚合物分子量与分子量分布的测定法生物大分子聚合物如多糖、多聚核苷酸和胶原蛋白等具有分子大小不均一的特点，故生物大分子聚合物分子量与分子量分布是控制该类产品的关键指标。在测定生物大分子聚合物分子量与分子量分布时，选用与供试品分子结构与性质相同或相似的标准物质十分重要。按各品种项下规定的方法，除另有规定外，同样采用分子量标准物质和适宜的G P C软件，以标准物质重均分子量（A L)的对数值对相应的保留时间U R)制得标准曲线的线性回归方程l g i^=a+&R，供试品采用适宜的G P C软件处理结果，并按下列公式计算出供试品的分子量与分子量分布。M w=2(RIM,)/^R lD=M V J/M n式中为数均分子量；八1为重均分子量；D为分布系数；尺/,为供试品在保留时间〗时的峰高；M,为供试品在保留时间〗时的分子量。(3)高分子杂质测定法高分子杂质系指供试品中含有分子量大于药物分子的杂质，通常是药物在生产或贮存过程中产生的高分子聚合物或在生产过程中未除尽的可能产生过敏反应的高分子物质。按各品种项下规定的色谱条件进行分离。定量方法①主成分自身对照法同高效液相色谱法（通则0512)项下规定。一般用于高分子杂质含量较低的品种。②面积归一化法同高效液相色谱法（通则0512) 项下规定^③限量法除另有规定外，规定不得检出保留时间小于标准物质保留时间的组分，一般用于混合物中高分子物质的控制。④自身对照外标法一般用于Sephadex 010凝胶色谱系统中/?■•内酰胺抗生素中高分子杂质的检查。在该分离系统中，除部分寡聚物外，■内酰胺抗生素中高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，以供试品自身为对照品，按外标法计算供试品中高分子杂质的相对百分含量。【附注】Sephadex G-10的处理方法色谱柱的填装装柱前先将约15g葡聚糖凝胶Sephadex G-10用水浸泡48小峙，使之充分溶胀，搅拌除去空气泡，徐徐倾人玻璃或其他适宜材质的柱，一次性装填完毕，以免分层，然后用水将附着玻璃管壁的Sephadex G~10洗下，使色谱柱面平整，新填装的色谱柱要先用水连续冲洗4〜6小时，以排出柱中的气泡。供试品的加入进样可以采用自动进样阀，也可以直接将供试品加在床的表面（此时，先将床表面的流动相吸干或渗干，立即将供试品溶液沿着色谱管壁转圈缓缓加人，注意勿使填充剂翻起，待之随着重力的作用渗人固定相后，再沿着色谱管壁转圈缓缓加入3〜5m丨流动相，以洗下残留在色谱管壁的供试品溶液）。0521气相色谱法气相色谱法系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带人色谱柱进行分离，各组分先后进人检测器，用数据处理系统记录色谱信号。1.对仪器的一般要求所用的仪器为气相色谱仪，由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统等组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均应根据分析要求适当设定。(1)载气源气相色谱法的流动相为气体，称为载气，氦、氮和氢可用作载气，可由高压钢瓶或高纯度气体发生器提供，经过适当的减压装置，以一定的流速经过进样器和色谱柱；根据供试品的性质和检测器种类选择载气，除另有规定外，常用载气为氮气。(2)进样部分进样方式一般可采用溶液直接进样、自动进样或顶空进样。溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样；采用溶液直接进样或自动进样时，进样口温度应髙于柱温30〜50°C;进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。将固态或液态的供试品制成供试液后，置于密闭小瓶中，在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在液态和气态达到平衡后，由进样器自动吸取一定体积的顶空气注人色谱柱中。(3)色谱柱色谱柱为填充柱或毛细管柱。填充柱的材质为不锈钢或玻璃，内径为2〜4m m，柱长为2〜4m，通则27
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