实验二 酶活力测定方法的研究（1）
——淀粉酶活性的测定
一、 研究背景
酶Enzyme，指具有生物催化功能的高分子物质。酶通过降低化学反应的活化能来加快反应速率，因而具有高效性，同时酶具有高度的专一性。酶的催化活性可以受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。酶在工业和人们的日常生活中的应用也非常广泛。例如，药厂用特定的合成酶来合成抗生素；加酶洗衣粉通过分解蛋白质和脂肪来帮助除去衣物上的污渍和油渍。
淀粉酶是一类水解淀粉的糖苷键的总称，按照其水解淀粉的方式，可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶是一种内切葡萄糖苷酶，催化水解α-1,4-糖苷键，生成α-麦芽糖和少量葡萄糖。β-淀粉酶从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1,4-葡聚糖链。对于象直链淀粉能完全分解得到麦芽糖和少量的葡萄糖。作用于支链淀粉或葡聚糖的时候，切断至α-1,6-键的前面反应就停止了，因此生成分子量比较大的极限糊精。
二、 研究目标
1. 掌握酶活力的测定方法 2. 进一步学会设计实验方案
3. 测定α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性
三、 研究策略
酶的活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数。 实验的总体思路是测定每分钟内催化生成的麦芽糖的量。 1. 酶的获取
淀粉酶广泛存在于禾谷物类的种子中α-淀粉酶是在萌发的过程中产生的。所以取萌发的种子浸提获取酶溶液。 2. 反应过程
β-淀粉酶不耐热，在高温下容易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下发生钝化。尽管在种子的萌发过程中，提取液中同时含有两种淀粉酶，可利用这两种淀粉酶的不同特性加以处理，钝化其一，即可测定另外一种酶的活力。 3.产物的检测
淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用还原糖的3,5-二硝基水杨酸法测定。
四、 研究方案及可行性分析 研究方案：
α-淀粉酶耐高温，而β-淀粉酶在高温下易失活。可以在适当的高温下水浴，使β-淀粉酶失去活性，而α-淀粉酶的活性不受很大的影响，这样分解的淀粉可以认为是α-淀粉酶催化的产物。同时可以测量α-淀粉酶和β-淀粉酶的总活力，从而推出β-淀粉酶的活力。 可行性分析：
温度可以通过恒温水浴来实现。试剂等都是实验室常见的，仪器实验室也有。
五、 具体实验设计 1、所用相关试剂： 1%淀粉溶液，pH5.6的柠檬缓冲液，3,5-二硝基水杨酸，麦芽糖标准液，0.4M NaOH 2、相关仪器：
分光光度计，水浴锅，离心机 3、实验步骤： （1） 酶液的制备
称取2g萌发的小麦种子；研磨成匀浆；转移到50ml容量瓶中至40ml左右，室温浸提15-20min后定容；混匀后3500rpm/min，离心20min，取上清液备用 （2） α-淀粉酶活性的测定
C1 C2 α1 α2 酶提取液 1ml，70℃水浴，15min， 冰浴 立即在冰浴中冷却 柠檬缓冲液
1ml 水浴 40℃，15min 0.4M NaOH 4ml，摇匀 40℃预热的淀粉溶2ml，摇匀
液 水浴 40℃水浴，5min 0.4M NaOH 4ml，摇匀
（3） α-淀粉酶及β-淀粉酶总活性的测定
取所制备的酶液5ml，放入100ml容量瓶中定容、稀释，混匀
C3 C4 αβ1 αβ2 稀释后的酶液 1ml 柠檬缓冲液
1ml 水浴 40℃， 