CREB-H基因在猪不同组织中表达谱及肝脏中的表达规律

发布时间:2023-01-26 20:13:56   来源:文档文库   
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CREB-H基因在猪不同组织中表达谱及肝脏中的表达规律
郭晓红;李步高;刘翠翠;李萌;张万锋;秦本源;刘敏;蔡春波;高鹏飞;曹果清【期刊名称】《《中国畜牧兽医》》【年(,期】2019(046009【总页数】8(P2543-2550
【关键词】;CREB-H基因;肝脏;表达谱;发育性表达规律
【作者】郭晓红;李步高;刘翠翠;李萌;张万锋;秦本源;刘敏;蔡春波;高鹏飞;果清
【作者单位】山西农业大学动物科技学院太谷030801;【正文语种】【中图分类】Q786
环腺苷酸应答元件结合蛋白H(cyclicAMP-responsiveelement-bindingprotein3-like3CREB-H/CREB3L3是环腺苷酸应答元件结合蛋白家族(cAMPresponseelement-bindingprotein,CREB的成员,具有转录激活作用[1-2]CREBH含有3个与CREB/活化转录因子(activatingtranscriptionfactorATF家族广泛同源的b-Zip区域:果蝇box-B结合因子-2(box-Bbindingfactor-2BBF-2、人类亮氨酸拉链蛋白(leucinezipperproteinLZIP和小鼠衰老星形胶质细胞特异性诱导物质(oldastrocytespecificallyinducedsubstanceOASIS研究发现,CREB-H基因主要在肝细胞中表达[3],在小肠、幽门胃中也有较少表

[4-5]
CREB-HcAMP反应元件(cAMPresponseelementsCRE/ATF家族分子具有同源性,并与这些分子结合于相同的序列[3]CREB-H在糖异生过程中起到促进作用。成纤维细胞生长因子21(fibroblastgrowthfactor21Fgf21是一种抗代谢综合征激素,CREB-H可激活肝脏Fgf21的表达[6-7]。研究发现,CREB-H可通过调控载脂蛋白的表达来参与甘油三酯的代谢[8]CREB-H是肝脏的重要代谢激活调控因子,Lee[8-9]通过基因敲除技术证明CREB-H参与调控肝脏脂肪生成及脂类分解等过程,进而维持脂质平衡;利用DNA测序技术对患有高甘油三酯血症病人的CREB-H基因进行测序,发现了许多可以导致机体不产生功能性CREB-H蛋白的突变位点[10]
目前,关于CREB-H基因的研究主要集中在小鼠[11]、人[5,11-13]及一些较低级的动物(如斑马鱼[14]上,在猪上鲜有报道。猪作为主要的肉制品来源,其体内脂质的代谢程度直接影响着猪肉的营养价值和口感,因此,研究CREB-H基因在猪各个组织中的表达谱及在肝脏组织中的发育性表达对猪肉品质的改良具有重要的指导意义。本试验拟采用实时荧光定量PCRWesternblotting技术研究CREB-H基因在猪中的表达规律,以期为猪脂质代谢调控机制的研究提供理论依据。1材料与方法1.1样品采集
马身猪和大白猪均由山西省大同市种猪场提供(两猪种各24,在相同的条件下进行饲养管理。分别在1306090120150180d时每个猪种选取4(公母各2进行屠宰,取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、小脑、下丘脑、背最长肌、股肌、腰肌组织,置于液氮中速冻,-80℃保存备用。1.2主要试剂及仪器
Trizol®Reagent试剂盒购自Invitrogen公司;PrimeScript®RTReagentKit

SYBR®PrimeScriptTMRT-PCRKit均购自TaKaRa公司;组织蛋白提取试剂盒、兔抗CREB-H多克隆抗体、鼠抗人GAPDH单克隆抗体、鼠抗人ACTB单克隆抗体、HRP-山羊抗兔IgGHRP-山羊抗鼠IgG均购自武汉博士德生物工程有限公司;0.22μmNC膜购自Thermo公司。ND-1000核酸蛋白测定仪购自NanoDrop公司;ABI-7500购自LifeTechnologies公司。1.3RNA提取及cDNA合成
按照Trizol®Reagent试剂盒说明书提取总RNA,总RNA的浓度和纯度用ND-1000核酸蛋白测定仪测定,-80℃保存备用。用PrimeScript®RTReagentKit进行反转录,合成cDNA-20℃保存备用。1.4CREB-H基因mRNA在马身猪和大白猪中的表达
利用NCBIPrimer-BLASTOligo7.0软件设计CREB-H18SrRNA基因特异性引物,引物序列见表1。引物均由生工生物工程(上海股份有限公司合成。参照SYBR®PrimeScriptTMRT-PCRKit说明书操作,以18SrRNA作为内参基因,用ABI-7500对目的基因进行实时荧光定量PCR扩增。PCR反应体系20μL:SYBR®PremixExTaqTMⅡ10μL,10mmol/L上、下游引物各0.8μL,ROX0.4μL,cDNA2μL,ddH2O6μL。PCR反应条件:95℃30s;95℃30s,60℃34s,共45个循环;95℃30s,60℃1min;95℃30s。每个样本重3次。CREB-H基因的相对表达量用2-△△Ct方法计算,结果以平均值±标准误来表示,用SPSS22.0的单因素方差分析对目的基因的表达差异显著性进行分析。1引物序列信息
Table1Primersequencesinformation
基因GenesGenBank登录号GenBankaccessionNo.引物序列Primersequences(5'→3'退火温度Annealingtemperature/℃产物大小Productsize/bpCREB-

本文来源:https://www.2haoxitong.net/k/doc/755fbdc59d3143323968011ca300a6c30c22f133.html

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