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发布时间：2023-12-02 01:47:45 来源：文档文库
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项目三SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质分子量
一实训目的
1掌握SDS-PAGE测定蛋白质分子量的操作步骤2学会聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理二实训原理
用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质（protein），主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应，因此，当电泳时，蛋白质分子的迁移率取决于其分子大小。SDS能破坏蛋白质分子间以及其他物质分子间的非共价键使蛋白质的构象发生变化，继而使蛋白质变性解离成单一亚基，从而降低或消除了各种蛋白质分子间的天然电荷差异，形成SDS-蛋白质负离子，因此，当电泳时，蛋白质分子的迁移率取决于其分子大小，当蛋白质分子量在1.2X104～16.5X104之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈直线关系，符合下列方程。LogMW＝K－bm(LogMW为分子量的对数，K、b为常数，m为迁移率
若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得其分子量.三、实训器材序号123456序号
1设备名称
垂直板电泳槽及附件直流稳压稳流电泳仪微量进样器玻璃注射器玻璃平板电炉试剂低分子量标准蛋白质样本
样品
3浓缩胶缓冲液
纯度、浓度
2mg/ml规格，型号可变压作用
以标准样品为对照即可确定样品各区带的成分
作为实验组来测定蛋白质的分子量
数量112141配制方法见表格下方同上
需要工具水浴锅、小烧杯，玻璃棒
需要工具
210~20mg/ml水浴锅、小烧杯，玻璃棒天平、容量瓶、棕色试剂瓶
呈弱酸性，使甘同上氨酸解离很少，在电场作用下，涌动效率低，二氯离子含量高，
形成较高的电位梯度压着蛋白质聚集在一起，凝缩为一狭小区带。
4分离胶缓冲液
呈碱性，甘氨酸解离度大，涌动速率增加，紧随氯离子之后，在电场作用下，蛋白质根据其固有的电性得到分离。保证电泳的PH，起传播电流作用
作为催化剂，产生自由基，加速凝胶聚合。去掉其电荷效应，使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量
同上
天平、容量瓶、棕色试剂瓶
5电极缓冲液 