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大苞水竹叶组培快繁及再生体系的建立

发布时间：2023-03-20 21:45:41 来源：文档文库

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大苞水竹叶组培快繁及再生体系的建立
1材料与方法
1.1试验材料和基本培养条件
本试验所需材料采集自广西壮族自治区药用植物园引种繁育圃内引种栽培的生长健壮、无病虫害的优良大苞水竹叶植株，选取其侧芽作为外植体进行诱导，先将大苞水竹叶侧芽表面洗净去污，用浓度为75%的乙醇灭菌30～45s，然后用无菌水冲洗1～3次，放入灭菌剂灭菌，再用无菌水冲洗2～5次，然后用无菌滤纸将侧芽表层的水分吸干，最后将测芽置于基本培养基上进行诱导培养，在平均光照度2000lx下培养，光照时间12h/d，温度（24±2）℃。
1.2适宜灭菌条件的筛选
设计2组消毒试验。第1组设计不同消毒剂种类：0.1%HgCl210min，2%NaClO20min，50%的84消毒液20min，2%H2O220min，从中筛选最适合的消毒剂；第2组设计不同的消毒时间：5、6、7、8、9、10min。所有的试验都是在接种后15d对试验对象的污染率、成活率进行统计。
1.3不定芽诱导分化条件的筛选
本试验基于MS、B5、N6培养基，添加NAA、IAA、6-BA这3种不同类型激素，并开展NAA浓度（0.5、1.0、1.5mg/L）、KT浓度（0.1、0.2、0.4mg/L）、6-BA浓度（1.0、1.5、2.0mg/L）的正交设计（表1），研究不同激素组合对大苞水竹叶不定芽诱导的影响，

每个处理10瓶，每瓶4个外植体，20d后记录外植体的诱导情况，比较不同组合诱导不定芽能力的差异。
1.4不定芽繁殖条件的筛选
在MS为基本培养基的基础上，以6-BA、IAA为生长调节激素，考察大苞水竹叶不定芽繁殖情况。通过6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）、IAA（0.2、0.4、0.6mg/L）2种激素浓度组合试验，对大苞水竹叶的繁殖培养基进行优化，每个处理10瓶，每瓶4个单芽，20d后测定试管苗生长情况和芽增殖倍数[芽增殖倍数=（20d后芽数-接种时芽数）/接种时芽数]，以芽增值倍数为主要考察指标来优化繁殖培养基。
1.5生根条件的筛选
为了研究大苞水竹叶无菌苗生根壮苗的最适合培养基，以MS为基本培养基，对IBA浓度（1.0、2.0mg/L）、活性炭（AC）浓度（0.5、1.0、1.5mg/L）进行组合试验，对大苞水竹叶的繁殖培养基进行优化，将生长健壮、高2～3cm的无根苗接种于4种不同处理的生根培养基上，每个处理10瓶，每瓶8个单芽，培养40d后统计结果，计算生根率与生根数平均值，相关公式如下：
生根率=（生根数/接种总数）×100%；
生根数平均值=（总生根数/接种总数）×100%。
1.6炼苗及移栽
当生根培养的大苞水竹叶瓶苗长至3～5cm高、有3张以上叶片和3～5条根时，即

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/45dfebb61cd9ad51f01dc281e53a580217fc50e8.html