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正在进行安全检测...

发布时间：2023-11-02 22:49:56   来源：文档文库   
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实验经常使用试剂、缓冲液的配制方式



1、1MTris-HCl□组份浓度1MTris-HCl（，，）□配制量1L
□配置方式1.称量置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调剂所需要的pH值。pH值浓HCl约70mL约60mL约42mL4.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保留。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的转变差专门大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。2、MTris-HCl□组份浓度MTris-HCl（）□配制量1L
□配置方式1.称取置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至。4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保留。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的转变不同专门大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。3、10×TEBuffer□组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH，，）□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HClBuffer（，，）100mL500mMEDTA（）20mL
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。

4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠（）□配制量100mL
□配置方法1.称取•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。


4.高温高压灭菌后，室温保存。

五、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl，KCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4□配制量1L
□配置方式1.称量以下试剂，置于1L烧杯中。NaCl8gKClNa2HPO4gKH2PO4
2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCl将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和mMMgCl2。

六、10M醋酸铵□组份浓度10M醋酸铵□配制量100mL
□配置方法1.称量醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.使用μm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、Tris-HCl平稳苯酚□配置方式

1.利用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏即可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应幸免利用。同时也应幸免利用结晶苯酚，结晶苯酚必需在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引发磷酸二酯键的断裂或致使RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，咱们推荐利用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.
苯酚平稳：因为在酸性pH条件下DNA分派于有机相，因此利用苯酚前必需对苯酚进行平稳使其pH值达到以上，苯酚平稳操作方式如下：①液化苯酚应贮存于-20℃，现在的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中掏出的苯酚第一在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。③加入等体积的1MTris-HCl（），利用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤加入等体积的Tris-HCl（），利用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，略微残留部份上层水相。⑦利用pH试纸确认有机相的pH值大于。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保留。

八、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方式

1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常利用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25：24：1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇那么有助于排除抽提进程中显现的气泡。
2.配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保留。
九、10％（W/V）SDS□组份浓度10％（W/V）SDS□配制量100mL
□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调剂pH值至。3.将溶液定容至100mL后，室温保存。10、2NNaOH□组份浓度2NNaOH□配制量100mL□配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解进程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。1一、NHCl□组份浓度NHCl□配制量100mL
□配置方法1.在的去离子水中加入的浓盐酸（），均匀混合。

2.室温保存。

1二、5MNaCl□组份浓度5MNaCl□配制量1L
□配置方法1.称取NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保留。

13、20％（W/V）Glucose□组份浓度20％（W/V）Glucose□配制量
100mL□配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。3.高温高压灭菌后，4℃保留。

14、SolutionI□组份浓度25mMTris-HCl（），10mMEDTA，50mMGlucose
（质粒提取用）□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1MTris-HCl（）25mLMEDTA（）20mL20％Glucose（）45mLdH2O910mL2.高温高压灭菌后，4℃保留。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

1五、SolutionII□组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS
（质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS50mL2NNaOH50mL2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

1六、SolutionIII□组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH（质粒提取用）□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc147gCH3COOH2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500mL。4.高温高压灭菌后，4℃保留。17、EDTA□组份浓度MEDTA□配制量1L
□配置方法1.称取Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调剂pH值值（约20gNaOH）。注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。

1八、1MDTT□组份浓度1MDTT

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/423cdbc0bed126fff705cc1755270722182e59c4.html

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