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NORTHERN BLOT基本概述

发布时间：2023-04-15 04:46:06 来源：文档文库

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NORTHERNBLOT基本概述一、目的学习NORTHERNBLOT技术，通过本实验了解NORTHERNBLOT的应用二、概述Northernblot的基本概述是将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移至尼龙膜等固相膜载体上，用放射性或非放射性标记DNA或RNA特异性探针对固定于固相膜上的mRNA进行杂交，洗膜去除非特异性结合杂交信号，经放射自显影或现色反应，对杂交信号进行分析。将杂交的mRNA分子在电泳中迁移位置与标准分子量分子进行比较，即可知道细胞中特定的基因转录产物的大小；对杂交信号的强弱比较，可以知晓该基因表达mRNA水平的强弱。三、试剂及材料1.水平电泳仪及电泳槽2.制冰机3.恒温水浴箱
4.凝胶成像系统5.EP管、移液器及Tip头6.5×MOPS电泳buffer（0.2MMOPSpH7.0,0.25NaAc,5mMEDTA）7.甲醛凝胶加样buffer（1mMEDTA,0.25%溴酚蓝,50％甘油）8.EB9.DIG标记EGFR探针10.DIGEasyHyb工作液11.20×SSC（3mol/LNaCl,0.3mol/L柠檬酸钠,用1mol/LHCl调节pH至7.0）12.鲑精DNA10mg/ml）四、操作步骤（一）、RNA转移与固定1.变性琼脂糖电泳分离总RNA样品完成后，1×MOPSbuffer淋洗凝胶片刻，10×SSC中浸泡平衡凝胶30min。2.按southernblot实验中DNA转移方法及装置转移总RNA至尼龙膜上（过程中注

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