AOAC 官方方法 2003.11 选定肉、家禽和海产品中金黄色葡萄球菌的计数
AOAC官方方法2003.11
选定肉、家禽和海产品中金黄色葡萄球菌的计数3MTMPetrifilmTM金黄色葡萄球菌测试片法
首次发布2003
（适用于熟制和切割的鸡肉、汉堡、三文鱼和香肠中金黄色葡萄球菌的计数）
注意：检测材料在使用以后要经过高压灭菌处理。表格2003.11为验证并采纳该方法的多个实验室的研究结果。A.原理
Petrifilm金黄色葡萄球菌测试片是一种即用型的培养基系统，含有冷水可溶性凝胶。测试片中的用于显色的经过改良Barid-Parker培养基对于金黄色葡萄球菌有选择性作用。在每个测试片中加入1.0mL的经过稀释的样品用于检测。接种后使凝胶剂固化，并将测试片在35±1℃或者37±1℃下培养24±2小时。测试片上紫红色的菌落为金黄色葡萄球菌。当只有紫红色菌落出现时，计算菌落数，测试结束。
如果检测中出现了背景菌落，要使用Petrifilm确认反应片来识别疑似菌落中的金黄色葡萄球菌。只要有其它颜色的菌落出现在测试片中，比如黑色菌落或者蓝绿菌落，就要使用Petrifilm确认反应片。Petrifilm确认反应片含有指示剂和脱氧核糖核酸。金黄色葡萄球菌生成脱氧核糖核酸酶（DNase），与指示剂反应产生粉红色区域。将确认反应片插入测试片中，将它们一起在35±1℃或37±1℃下培养1－3个小时。金黄色葡萄球菌（少数情况下可能是猪葡萄球菌和中间葡萄球菌，两者都会产生肠毒素）能产生粉红色晕环。不管晕环面积多大，将所有的粉色区域计为金黄色葡萄球菌。B.设备和试剂
（a）3MPetrifilm金黄色葡萄球菌测试片－3MMicrobiology（St.Paul,MN）生产的测试片中含有冷水可溶性凝胶和用于显色的经过改良的Barid-Parker培养基。
（b）3MPetrifilm确认反应片－3MMicrobiology生产的反应片中含有甲苯胺蓝和DNA。
（c）塑料压板－3MMicrobiology生产的带有把手的压板，边壁光滑并能用于将样品均液均匀地分布在培养测试片中的生长区域。
（d）移液管－1.0或10.0mL校准用移液管，刻度为0.1mL。3MTM电子移液器和尖嘴，或者同等性能用于转移1.0mL液体的设备。
（e）菌落计数器－标准设备，优先使用Quebec型，或者是能够提供同等放大倍数和可见度的设备。
（f）NaOH溶液－无菌，浓度1M。将20gNaOH置于500mL能承受压热器作用的容器中，用500mL水溶解。在121℃下高压灭菌处理15分钟。
（g）磷酸盐缓冲稀释液—（1）原液－将34gKH2PO4溶解于500mL水中，用大约175µLNaOH溶液（1M）将溶液pH值调整至7.2，并稀释到1L。储存于冰箱中。（2）稀释剂－用水将1.25mL原液稀释至1L。用此溶液制备稀释空白液。配制足够多的溶液，以弥补高压灭菌处理中的溶液损耗。在121℃下高压灭菌处理15分钟.
（h）搅拌器－配有灭菌罐的高速搅拌器（16000－18000rpm）
（i）培养器－温度保持在35±1℃或者37±1
