第五章 分子生物学的研究方法（上）
西南大学生命科学学院09级XX(仅代表个人观点)
1，哪些重要的科学发现和实验推动了DNA重组技术的产生和发展？
答：1，确定遗传信息的携带者是DNA而不是蛋白质；2，DNA的双螺旋结构模型和半保留复制机制的提出；3，中心法则，操纵子学说的提出和密码子的破译；4，重组工具酶的发现；5，运载体重组质粒的发现。
2，如何理解PCR扩增的原理和过程。
答：原理：DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
过程：1，变性，将DNA在临近沸点的温度下加热使变性，双链打开；2，退火，引物与模版的相结合；3，链的延伸，DNA合成。
3，简述定量PCR的原理和过程。
答：实时定量PCR反应在带透明盖的塑料小管中进行，激发光可以直接头孤傲管盖，使其中的荧光探针被激发。一逛探针事先混合在PCR反应液中，只有与DNA 结合之后，才能被激发发出荧光。随着新和成DNA片段的增加，结合到DNA上的荧光探针，即被激发产生的荧光增加。
4，基因组DNA文库和cDNA文库在构建原理和用途上的主要区别是什么？
答：基因组DNA是把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体结合，导入微生物细胞形成克隆。应用：主要用于基因组作图、测序和克隆序列的对比。
cDNA文库是以mRNA为模版反转录而成的序列，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增。
应用：筛选目的基因、大规模测序、金银芯片杂交等功能基因组学的研究。
5，基因克隆的方法主要有哪几种？简述各种方法的作用和用途。
答：1，RACE技术，用于在已知cDNA序列的基础上克隆5’端和3’端缺失的序列；2，应用cDNA差示分析法克隆基因，在没有任何探针的情况下，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDAN两端接头的方法特异性的扩增目的基因片段。3，Gateway大规模克隆技术，用于实现不需要传统的酶切连接过程的基因快速克隆和载体间平行转移，为大规模克隆基因组注视的可译框架提供保障；4，基因的图位克隆法，用于分离未知形状目的基因。
6，在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子质量的方法？
答：核酸凝胶电泳、蛋白质SDS-PAGE
7，蛋白质组学的研究对象和目的是什么？主要有哪些技术和方法。
答：研究对象：某遗物种、个体、器官、组织或细胞在特定条件、特定时间所表达的全部蛋白质图谱。技术：双向电泳技术、蛋白质印迹法、蛋白质的质谱分析技术
8，SNP作为第三代遗传标记的优点是什么？
答：(1) SNPs在基因组中的相对高频分布，非常适合用于关联分析。
(2) SNP在人群中是二等位基因性的，在任何人群中其等位基因频率都可估计出来；
(3) 与串联重复的微卫星位点相比，SNP是高度稳定的，尤其是处于编码区的SNP(cSNP)，而前者的高突变率容易引起对人群的遗传分析出现困难；
(4) 部分位于基因内部的SNP可能会直接影响产物蛋白质的结构或基因表达水平，因此，它们本身可能就是疾病遗传机制的候选改变位点；
(5)易于进行自动化、规模化分析，缩短了研究时间。
9，基因分型的方法有哪些？简述其原理。
答：基因分型是利用生物学检测方法测定个体基因型的技术。又称为基因型分析，PCR基因分型技术，使用技术包括聚合酶链反应（PCR）、DNA片段分析、寡核苷酸探针（ASO probes）、基因测序、核酸杂交、基因芯片技术等。
10，已知一个cDNA3’端的部分序列，请设计实验流程得到该基因的全长cDNA。
答：1，根据已知序列设计三条巢式引物，进行5’RACE，拿到5’序列；
2，同时设计巢氏引物，进行3’RACE拿到3’序列；
3，序列拼接；
4，设计引物扩增全长序列
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/1800c663ddccda38376baf22.html
文档为doc格式