2020年化学发光室实习小结 doc

　　第一篇:《实习报告》

　　实习报告

　　尊敬的学校领导

　　在经过两个月的实习锻炼，我从微生物室转入到了免疫室，带教老师告诉我要在免疫室呆两个月，并在化学发光免疫呆一段时间作了解。

　　在免疫室里，我们用的是全手工加样，虽然有点麻烦，但是锻炼了我的实际动手能力，并了解他们的流程，理解各个试验的原理，刚进入时由老师带领，一进去就把实验原理书给我们，叫我们看懂。 免疫室里我学会了乙肝两对半的原理，做法和分析以及做完后的再次检验，输血前就包括了乙肝两对半、梅毒、艾滋、丙肝等等…学会的也挺多的。在免疫室也学会了很多，也得到了老师的再次肯定与赞扬。接下来我会进入血库，常规室，抽血等等科室。一定会好好学习，努力的！

　　陈嘉杰

　　2013年8月20日

　　第二篇:《化学发光法测试模式相关结果小结》

　　基于磁分离的化学发光发测定试剂的项目设计及初步进展

　　2008年1月

　　一、项目设计背景

　　国际成熟的免疫学自动检测体系及分析

　　早在上世纪八十年代，一些知名的IVD厂商就开始全自动免疫分析仪的研制。发展到今天，市场上的全自动免疫分析仪已经非常成熟，而检测原理也有着一定的区别。对此，我们做一个简单的分析。

　　Abbott公司，第一代产品也是目前世界上临床应用最为成功的全自动免疫分析仪，Axsystem,检测原理是基于聚苯乙烯粒子包被，碱性磷酸酶标记(Alp)的荧光分析技术，仪器的洗涤体系为其专利的醋酸纤维吸附洗涤，洗涤及检测杯设计得非常精致，科学，保证了检测体系的特异性和精密性，因此在国内，很长一段时间里，Axsystem的检测结果都作为一些项目检测的金标准。但是由于体系的检测信号为荧光信号，因此其检测量程相对较低，例如CEA检测高限最高为500ng；从而影响了项目的检测性能。第二代产品Architect系列是基于磁珠包被的，吖啶酯标记的化学发光免疫学检测分析仪。该体系采用磁珠分离体系，吖啶酯标记的化学发光技术，吖啶酯作为化学发光法标记物，优点很多首先缩短了检测光信号所需要的时间，其次发光集团能够在强碱的作用下脱落，之后在均匀的液相中收集光信号，使体系可能拥有更好的精密度，同时光信号的采集是对整个峰值的积分，使检测体系拥有更广的检测量程，例如CA125在该体系的检测高限可达1500ng，是Axsystem的3倍。但吖啶酯标记的化学发光技术为Bayer公司的专利，在应用上存在限制。

　　Bayer公司（Siemens），全自动免疫检测分析体系实际是来自Ciba-corning检测体系，即吖啶酯标记，磁珠捕获的化学发光检测体系。该体系同Architect体系一样，应用吖啶酯有专利的限制。

　　Beckmen－Coulter公司,碱性磷酸酶标记，磁珠捕获的化学发光检测体系，碱性磷酸酶标记的缺点很多首先，作为标记物，分子量过大，在免疫学反应过程中可能存在空间位阻从而影响捕获，其次人血清中含有碱性磷酸酶的同工酶，可能存在由于非特异性吸附造成的非特异性发光反应。但是，相对于吖啶酯标记，碱性磷酸酶没有专利限制，标记技术成熟，发光反应与标记物浓度之间有着良好的信号相应关系。

　　Johnson&Johnson，HRP标记，管式捕获，该体系基本是在HRP酶标记显色的基础上略作改进，采用HRP标记技术，标记技术成熟，市场上应用时间长，整个标记体系在市场上已经非常成熟，但该体系缺点很多，管式捕获，包被流程复杂，工艺要求高，同时管间精密度也比较难控制，HRP的化学发光体系，由于整个反应非常复杂，因此，发光信号和标记物之间相应关

　　系较差，即发光信号与标记物浓度之间没有很好的比例关系，从而影响检出灵敏度和量程；从这点而言并不适合做量程要求较高的定量检测。

　　Roche，以专利的电化学检测在整个免疫学检测体系中独树一帜，优点很多，灵敏度高，量程广，但缺点也有，但由于有专利限制，也影响了其应用。

　　二、项目设计依据

　　为什么选择化学发光？

　　免疫学检测(immunoassay)是一类以抗原抗体之间发生的免疫学反应为基础的检测。根据检测过程中的最终检测信号的不同，可以分为放免、可见光检测（optical detection）如比色类及以酶联免疫吸附为代表的吸光度检测（absorbance），光发射类（emission）主要是荧光、化学发光信号的检测。

　　上述这几大类的检测中以可见光类的检测灵敏度最低，但由于对仪器依赖较小，检测方法成熟，收费较低，因此，在我国的广大地区有着广泛的应用；但由于测定主要以定性测试为主，并且灵敏度较低，量程只有20倍左右，因此可以检测的项目非常有限，这也限制了这种方法在临床中的应用。

　　光发射类主要有荧光和化学发光类。荧光类的信号检测包括前几年炒作非常热的时间分辨荧光检测，用于小分子检测的能量传递类检测等；相对于可见光类信号检测，荧光信号的检测灵敏度高，量程可达103左右，但荧光信号的检测受到多种因素的干扰，如标本的生物学本底，激发光波长和发射波长之间的狭窄的斯托顿位移等，都将影响检测的特异性，进而降低了检测的实际灵敏度和量程；同时仪器检测成本非常高（激发波长需要488nm的激光器），似乎更适合于多相检测。

　　相对于其他方法，化学发光类的信号类检测灵敏度最高，检测的理论量程可达105左右，但实际不同的发光体系检测灵敏度略有差异，检测量程的差别也非常大。化学发光类免疫学检测按标记物进行分类，可分为酶促化学发光免疫学检测和化学发光标记免疫学检测。化学发光标记应用的最广的标记物主要是吖啶酯类，这是一种比较理想的标记物，但由于存在严格的专利保护，因此我们基本不存在应用的可能性。酶促化学发光标记物主要有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（Alp），一般认为Alp灵敏度高于HRP，但实际上，不同的底物体系的实际检测灵敏度差异很大，而不同的检测体系实际检测量程也差别很大。本实验室测试结果显示，在同一检测体系中，已筛选出的灵敏度最佳的HRP底物体系和 Alp底物体系相比，Alp体系的量程和检出灵敏度均优于HRP，并且Alp体系发光信号非常稳定，因此，就发光体系本身而言，Alp体系确实优于HRP。但是Alp的应用在免疫学检测中，存在很多其他问题，如交联，人血清标本中内源性Alp的干扰问题等等，都限制了Alp在临床中的应用。

　　为什么是磁珠？

　　免疫学检测按检测方式来分有均相和非均相。前者由于没有洗涤过程，抗干扰性非常弱，因此，目前不是免疫学检测的主流。非均相检测又可分为基于聚苯乙烯板包被的固相反应和基于粒子（聚苯乙烯粒子或磁性粒子）包被的液相反应。

　　相对于固相反应，液相反应优点很多，在标记物相同的情况下，液相反应有更宽的检测量程。并且，对于磁珠来说，易于洗涤，理论上检测试剂可能有更好的精密度。

　　对于制备工艺来说，采用磁珠进行包被，生产工艺简单，生产过程的人员设备成本非常低，生产流程易于控制，容易规模化。

　　为什么是自动化的免疫分析体系？

　　首先，发光法检测本身非常容易受到环境因素的影响，因此，需要较为封闭的检测体系，而酶促化学发光，对检测体系还有温控的要求，磁珠的洗涤也需要相应的配套仪器，所有这些要求，如果分拆成手工操作，将增加其不精密度和测定时的不准确度，从而削减方法学本身的优势；同时，手工法的测定模式从长远来看，应该会慢慢退出中高端的医院市场。

　　其次，自动化的免疫分析体系的研制成功，将使我们有可能为医院提供模块式小型工作站的服务模式。根据市场上各大IVD厂商推出的仪器系列，我们很清楚的看到，整合已经是将来的发展趋势，如Roche公司提供的免疫测试模块和生化测试模块，使得用户能够根据测试量的大小来自行整合，从而对实验室的检测资源进行优化。我们公司已经拥有全自动的生化分析仪，配合全自动的免疫分析仪，将使我们的检测系统更具有竞争力；从而使我们的产品在未来很长一段时间内，能够立于不败之地。

　　三、项目设计方案

　　基于上述分析，我们对于化学发光免疫学检测系列试剂的开发的定位为基于磁珠包被的酶促化学发光全自动免疫分析体系。项目具体设计如下

　　 第一阶段检测模式的确定，由于现有的应用于免疫学检测的方法主要有夹心法和

　　竞争法。因此，确定整个检测流程及检测模式时，应包含这两种检测方法的通用模式。

　　 第二阶段完成部分目前医院里最具市场的项目开设及基本性能考核；同时，仪器开

　　发能基本确定加样体系，洗涤体系及检测体系，初步确定仪器开发方案并完成简易的仪器测试；

　　 第三阶段完成所有开设项目的基本性能考核，仪器开发完成。

　　 第四阶段完成所有项目溯源性考核，性能考核，临床考核，开始项目申报。

　　 第五阶段完成市场后完善，开设新的项目。

　　四、检测模式的确定

　　通过对市场上现有免疫学化学发光检测模式的筛选，计划采用以链霉亲和素包被的磁珠（SA－Mag）为固相捕获载体，以辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶作为标记物的化学发光检测模式。目前我们已经获得如下结果

　　 不同臂长生物素比较

　　由于空间位阻对SA－Mag的捕获效应有一定影响，因此，考核不同臂长的生物素对测定结果的影响。通过对不同臂长的生物素的考核，确定最佳臂长的生物素，用作进一步的测试。

　　 不同粒径SA－Mag的筛选

　　由于磁珠粒径的大小决定了单位体积内SA的含量，也决定了单位体积的磁珠的捕获能力，一般来说，粒径越小则单位体积的SA含量越高，磁珠的捕获力越强；但同时粒径越小，磁珠在多次洗涤转移中的损失也较大（上吸法分离磁珠），经过测试及综合评估，最终选出合适粒径的磁珠作为固相捕获载体。

　　HRP及Alp发光底物的筛选

　　采用通用模式对来自不同供应商的底物进行检测分析。即HRP/Alp和Biotin进行交联，分别用SA包被的磁珠和SA包被的发光板考核现有的HRP/Alp发光底物，现有各底物体系中，测定结果初步表明，底物是化学发光系统的决定因素。

　　HRP现有底物的灵敏度在本系统的测试为50pg/ml,量程在10左右；

　　Alp底物检测灵敏度在5 pg/ml，量程在10左右，相对光子数与Alp浓度之间有着良好的响应关系。

　　Alp交联方法确定

　　通过对Alp两种交联方法比较，最终选择过碘酸钠法对Alp进行抗体交联。 43

　　HRP与Alp两种标记物发光法测定比较

　　选用CA125作为待测物，对两种酶促化学发光法做比较，分别对灵敏度，量程，信号与浓度之间的响应关系进行测试比较，最后确定采用Alp作为酶标记物，作进一步的测试。

　　五、相关项目测试结果

　　按照上述测定模式，已经完成CA125，CEA，AFP，PSA，fPSA等肿瘤标志物的抗体配对工作。并完成相关项目性能指标的测试。

　　甲状腺素类测试

　　甲状腺素类主要打算开设三个项目总T3，总T4和TSH。目前已完成总T4的体系构建及性能考核。总T3测试正在进行中。

　　部分项目性能初步考核结果如下

　　3、稳定性测试

　　完成CA125及总T4Alp酶接物工作液37℃3天热稳定性考核，测试结果良好，完成肿瘤标志物类Biotin抗体复合物工作液热稳定性考核，结果良好。 目前，测试结果显示，已基本Alp酶促发光的测试平台的构建，完成上述七个产品（CA125，CEA，AFP，PSA，fPSA，总T4，总T3）的校准体系及质控体系的筛选和相关稳定性测试。而进一步的性能考核及抗干扰性，校准品的溯源性测试，临床考核等都需要仪器，才能完成。{化学发光室实习小结}.

　　六、最终测试流程总结

　　根据上述测试结果，现有两种测试模式夹心法；竞争法。基本涵盖了现有的免疫学检测项目的测试模式。

　　夹心法测试流程如下

　　生物素化抗体＋样本＋酶接物 37℃℃测试读数

　　竞争法测试流程如下

　　生物素化抗体＋样本 37℃加入链霉亲和素磁珠 ＋酶接物℃测试读数

　　七、仪器开发模式确定

　　根据目前实验进展，我们认为项目开发已经完成第一阶段的工作，而第二阶段已经试剂开发已经完成一部分，根据市场考核结果，进一步开发乙肝两对半项目开发，基本能满足市场需求。

　　因此，仪器开发希望能基本确定模式，并根据设想的模式，提供简易的平台做相关模式的考核及比较，重点是加样方式，洗涤模式，孵育模式及检测；从而确定最终仪器的整个开发模式。

　　小结人彭波

　　第三篇:《核医学实习总结》

　　在核医学实习的短短两周，熟悉和掌握了检验核医学的基本任务是应用核素示踪技术和体外放射分析技术进行机体的功能研究和对体内的微量物质实施超微量分析，以揭示机体在生理或病理状态下的代谢规律,为疾病的诊断治疗等提供依据，检测的项目主要包括甲状腺激素、胰岛激素、皮质醇、醛固酮、促肾上腺皮质激素、性激素、甲胎蛋白等激素的测定。熟悉掌握了其基本原理分为化学发光和放射免疫两方面，掌握了手工放射免疫的操作方法。

　　第四篇:《化学发光检测》{化学发光室实习小结}.

　　第一章 化学发光技术

　　一、 免疫学检测发展阶段

　　免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程，如图1所示。

　　20世纪 60年代 70年代 90年代 时间

　　图1免疫学检测发展阶段

　　尽管免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，但是从我国临床免疫诊断现状来看，无论是临床应用方面，还是产业化角度，都处于相对比较落后的状态，亟待改进。下表１.１就此做一比较

　　表1 中国免疫诊断现状

　　由以上分析不难看出，化学发光免疫检测是大势所趋；而取代进口，发展我国的化学发光检测事业，

　　正是临床检验界着手发展的方向。由此，我公司自1998年立项至今，致利于化学发光检测方案设计，自行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件，而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临床检验界提供了一套完善的解决方案。

　　二、 化学发光免疫分析技术

　　【概述】

　　本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。

　　化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 【原理】

　　在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图2，3，4所示。

　　如图2双抗体夹心法反应原理示意图

　　化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

　　具体说来，我们采用的是辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（Luminol）底物发光系统，如图5所示。

　　我们的核心技术之一在于自行研制开发的发光底物系统，该系统与国外同类产品的比较表明，不仅主要性能指标达到了国外产品水平，并且由于自行生产，因此大大降低了发光底物的成本。在该底物系统中，我们采用特殊的复合型增强剂，发光快，强度高，发光平台期长，可达30~60分钟，因此完全可以满足临床检测的需要。其发光平台期测定结果如图6所示

　　（1）与放免（RIA）产品比较

　　与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩

　　短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （2）与酶免（ELISA）产品比较

　　灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 （3）与进口全自动发光比较

　　试剂成本远远低于进口全自动发光试剂，为开放体系，也可适用其他发光检测仪器检测。

　　【应用】

　　发光免疫分析作为一种非放射性免疫标记技术，除了具有灵敏、特异、标记物稳定等特点外，其检测程序亦简便、快速，只需微量标本，近年来临床上已应用于检测各种激素、肿瘤标志物、药物及其他微量生物活性物质，亦可用于细菌和病毒感染的快速诊断。

　　三、 技术优势

　　【技术路线的确定】

　　为适应中国临床检验的实际需要，我公司确定了以下的技术路线，如下表7所示 【技术鉴定】

　　（1） 化学发光试剂的现状 ▲ 已通过河北省科委鉴定

　　▲ 国外进口发光剂对比结果符合率为98%，部分技术指标超过进口发光剂。

　　▲ 甲胎蛋白（AFP）化学发光定量检测试剂盒已通过中国药品生物制品检定所检定，各项指标优异。 ▲ 癌抗原125（CA125）化学发光定量检测试剂盒已通过中国药品生物制品检定所检定，各项指标优

　　异。

　　▲ 催乳素（PRL）

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/0c925adcdf3383c4bb4cf7ec4afe04a1b171b032.html