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套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子

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２００２年第４期　植物检疫ＰＬＡＮＴＱＵＡＲＡＮＴＩＮＥ　
套式ＰＣＲ直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子　
易建平　陶庭典　潘良文　沈禹飞　印丽萍　郑建中　
（上海出入境检验检疫局
２００１３５）　
Ｄｉｒｅｃｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｉｌｌｅｔｉａ　ｉｎｄｉｃａ　ｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅｓ　ｂｙ　ｎｅｓｔ　ＰＣＲ．Ｙｉ　Ｊｉａｎｐｉｎｇ，Ｔａｏ　Ｔｉｎｇｄｉａｎ，Ｐａｎ　Ｌｉａｎ—　
ｗｅｎ，Ｓｈｅｎ　Ｙｕｆｅｉ，Ｙｉｎ　Ｌｉｐｉｎｇ，Ｚｈｅｎｇ　Ｊｉａｎｚｈｏｎｇ（Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｅｎｔｒｙ—Ｅｘｉｔ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００１３５）　
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ｎｅｓｔ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｍｅｔｈｏｄ　ｕｓｉｎｇ　ｐｒｉｍｅｒｓ弋　，　
Ｔ４　ａｎｄ　１＿３／，］｜、４　ｗａｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｔｏ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅｓ　ｏｆ　Ｔ／ｌｌｅｔｉａ　ｎｄｉｃａ．Ｏｎｅ　ｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　４１５ｂｐ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｏ　８　ｈｏｕｒｓ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｈａｔ　ｏｖｅｒｃｏｍｅ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ　ｏｆ　ｄｏｒｍａｎｃｙ　ｏｆ　ｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｃｅｌｉ—　ｕｍ　ＤＮＡ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ｉＳ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ／ｌｌｅｔｉａ　ｉｎｄｉｃａ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｎｅｓｔ　ＰＣＲ，ｄｉｒｅｃｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｔ／ｌｌｅｔｉａ　ｉｎｄｉｃａ，ｔｅｌｉｏｓｐｏｒｅ　
摘要　用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板ＤＮＡ，利用印腥特异性引物Ｔ３／ｒ６，Ｔ３／ｒ４和　套式ＰＣＲ（ｎｅｓｔ　ＰＣＲ）扩增技术直接检测印腥冬孢子，检测的灵敏度可达１个冬孢子。检测时　间缩短为１天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的ＰＣＲ检测技术适用于口岸印腥检疫的需　要，解决了常规ＰＣＲ检测中ＤＮＡ制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。　
关键词　套式ＰＣＲ
直接检测　印度腥黑穗病菌　冬孢子　
小麦印度腥黑穗病菌（Ｔｉｌｌｅｔｉａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｍｉｔｒａ，简称印腥）是世界范围的危险性有害　
印腥和近似种Ｔ．ｗａｌｋｅｒｉ形态特征非常相　似的问题【１０　；常规ＰＣＲ技术样品前处理时　间比较长，除了冬孢子休眠和不具存活力的　影响外，冬孢子少且萌发培养繁殖得到菌丝　的过程长达２～３周，由此限制了ＰＣＲ在口　岸检疫中的推广和应用。也有直接从冬孢子　中提取ＤＮＡ用于ＰＣＲ技术检测的报　道【７，　，但所用的引物Ｔ１１７Ｍ１／２不能区分　
生物，主要分布在印度、巴基斯坦、伊朗、伊拉　克、尼泊尔、阿富汗、巴西、墨西哥、美国和南　非等地【１－－４　Ｊ，近年来印腥的分布区域有不断　
扩展的趋势。２００１年１２月我国加人ＷＴ０　
后，随着粮食市场的开放，国外质优价廉的粮　食极具竞争力，越来越多的的粮食（主要是小　麦）会涌人国内，势必增加了印腥传人的机会　和风险，给口岸检疫带来印腥检测的新难题。　目前国内外常用的检测方法是形态特征鉴定　和常规ＰＣＲ技术＿５￣９　Ｊ。形态特征鉴定面临　
印腥与及其近似种Ｔ．ｗａｌｋｅｒｉ［１１　Ｊ。美国在　
一
段时间内将混杂在小麦中的Ｔ．ｗｌｋｅｒｉ误　
诊为印腥。２０００年Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ等报道了５对　
印腥特异性引物　５，我们已经在印腥的检测　
本文为国家检验检疫局课题“小麦印度腥黑穗病菌鉴定检测技术”的一部分。　收稿日期：２００２—０３—０７　
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本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/02a280fc76a20029bd642d54.html