2012年11月第9卷第33期·论著·CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报白藜芦醇是一种多酚类植物化合物，是普遍存在于葡萄酒中的活性成分，近期研究表明白藜芦醇具有抵抗肥胖、抗高血糖和高血脂等作用，对能量代谢疾病有潜质的治疗作用[1]。白藜芦醇在哺乳动物中主要通过激活组蛋白脱乙酰基酶沉默信息调节因子1（SIRT1）发挥作用[2]。SIRT 家族共有7个成员，其活性都依赖于细胞内NAD+/NADH 的比例，提示SIRT 家族可能参与能量代谢的调控[3]。已有研究表明，白藜芦醇通过激活SIRT1，进而抑制脂肪酸合成、增加脂肪降解，并能促进糖异生抑制糖酵解作用[3]。然而，白藜芦醇对SIRT 家族其他成员的调控作用尚未见报道。本文采用高糖和高脂肝细胞模型，检测白藜芦醇对两种细胞模型脂肪积累的影响，并检测在两种细胞模型中白藜芦醇对SIRT 家族成员表达量的影响，进一步探讨白藜芦醇抑制不同条件引起的脂肪积累的分子机制。1材料与方法1.1细胞和主要试剂本研究采用的正常人肝细胞HL7702购自中科院上海细胞库，采用含10%胎牛血清的DMEM 培养基进行培养，培养条件为37℃、5%CO 2。白藜芦醇购自Sigma ；SIRT 家族成员抗体以及HPR 二抗均购自Santa Cruz ；Protein Detector LumiGLO Western Blot Kit 购自KPL 公司；油红O 购自Sigma 公司；PVDF 膜购自Roche 。1.2细胞处理细胞根据处理方式不同分成以下四组：HP 组（高脂处理，培养基含有200μmol/L 软脂酸）、HPR 组（高脂+白藜芦醇组，培养基含有200μmol/L 软脂酸钠和50μmol/L 白藜芦醇）、HG 组（高糖处理，培养基含4500mg/L 葡萄糖）和HGR 组（高糖+白藜芦醇组，培养基含4500mg/L 葡萄糖和50μmol/L 白藜芦醇）；各组细胞处理24h 后收获，进行下一步的实验。1.3油红O 染色细胞采用4%多聚甲醛固定4min ，PBS 清洗，后加入稀释过的油红O 溶液，摇床染色20min ，自来水冲洗，然后进行以下实验：苏木素复染10s ，1%盐酸酒精分化，拍照；或采用异丙醇溶解溶液，收获溶解液，在510nm 波长下检测吸光值。实验均重复3次。1.4总蛋白提取预冷的PBS 洗涤细胞2次，按照细胞数1.0×106/20μL 裂解液的比例，加入预冷的单去污裂解液[50mmol/L Tris （pH 8.0），150mmol/L NaCl ，1%NP-40]，同时按一定比例加入蛋白酶抑白藜芦醇对肝脂肪积累的抑制作用及其分子机制李燕强1华伟娜2杨俊霞1潘志强11.徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室，江苏徐州221000；2.广东省罗定市廷锴纪念中学，广东罗定527200[摘要]目的研究白藜芦醇对SIRT 基因家族表达的影响，探讨白藜芦醇抑制不同条件引起脂肪积累的分子机制。方法分别用高糖、高糖+白藜芦醇、高脂、高脂+白藜芦醇的培养基处理肝细胞HL7702，油红O 染色法检测细胞内脂肪积累水平；后提取各组蛋白质，Western blotting 方法检测不同组间SIRT 基因家族各成员的表达情况。结果白藜芦醇能明显降低高脂引起的脂肪积累，对高糖引起的脂肪积累作用不明显；在高脂条件下，白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT3、SIRT4和SIRT5的表达增加，使SIRT7表达降低；在高糖条件下，白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT4、SIRT5和SIRT7的表达增加。结论SIRT1、SIRT3和SIRT7是白藜芦醇抑制脂肪积累的关键基因。[关键词]白藜芦醇；肝脂肪积累；抑制作用；分子机制[中图分类号]R735.7[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）11（c ）-0009-03Effect and mechanism of resveratrol on inhibition of fat accumulation in liv -er cellsLI Yanqiang 1HUA Weina 2YANG Junxia 1PAN Zhiqiang 11.Anesthesiology Key Laboratory of Xuzhou Medical College in Jiangsu Province Anesthesia and Analgesia Application Technology Key Laboratory in Jiangsu Province,Jiangsu Province,Xuzhou 221000,China;2.General Cai Tingkai Memo -rial Middle School in Luoding City,Guangdong Province,Luoding 527200,China[Abstract]Objective To investigate the effect of resveratrol on SIRT family and the different mechanism of inhibited effect of resveratrol on fat accumulation in liver cells causing by different conditions.Methods Liver cells were treated by high palmitate,high palmitate +resveratrol,high glucose or high glucose +resveratrol respectively.Then the level of fat accu -mulation was measured by Oil red O staining.The SIRT family protein level was detected by Western blotting.Results Resveratrol could significantly decrease fat accumulation caused by high palmitate,but not by high glucose.Resveratrol could increase the expression of SIRT1,SIRT3,SIRT4,SIRT5,but decrease SIRT7in high palmitate condition,while it could increase SIRT1,SIRT4,SIRT5and SIRT7expression in high glucose condition.Conclusion SIRT1,SIRT3and SIRT7play important roles of inhibiting fat accumulation inducing by resveratrol.[Key words]Resveratrol;Fat accumulation in liver cells;Inhibition;Mechanism[作者简介]李燕强（1978.8-），男，广东从化人，博士研究生，助理研究员；研究方向：生物医学工程。[通讯作者]潘志强（1974.7-），男，安徽淮北人，博士研究生，副研究员；研究方向：药物的脑保护作用及机制。9
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