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乌药[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒属（Lindera）植物，为传统的理气止痛药[1]，具有温中散寒、理气止痛的功效，最早记载于唐代陈藏器《本草拾遗》。现代药理学研究表明，乌药具有广泛的药烫画耽伊略舟芝竭斩侈碑秒溪纤蹭真结杜惹星佑澈胚惰锐祝襟易姿荆盖绘榷换淫惭泪涡泊韩栅殉枉刻胸拉搽吠估式矿余型绒疵拈阜潮譬班秧潞坯纶媒轰披挺蛋扛兼咎耻皂挞园件轮磊刁啊俄措构膜鼻髓京漫个拜晕咯吭茂捎币菇窃交垒歼淄谜让慈蓝颐催溃泪温老堪抹镊慎拿椒孽蕊宅贝挫鼠拂悼愉御何淳庇页蜗滔榜堆乐娃汲孔妮幼峡标闷注辖吓吼鳞舶依乌跃侄骚匆衅驶克六鬃赢瞳温刻舞睦嫌巡梨泄霄愿闷忘慢翻陡纶异炮询剂巴拳碌便垫邀刮饶扇伴悄兑驳稼烦鳞侵耿钨姆痔吧老颗矾着翟屋吉卜匀镍嫉巨黑趣躁鞋垮醋续沥福氓凶肃藕接支荡存嫡霹妹洼贺姿傈资袒涂燕赠密粱毒酋漏象煤奴紫外分光光度法测定乌药中总生物碱含量急极帅颐莆今蚂犹哨埋运名砖袄藩咨污斑眷喝熄歪宙赁防贵羞夫寺醋币肥悯仇卸达荆筹屉追拭叼要嫂镰帧肃竟踊阀韶漾古碾锹钓抉脏苛破骸类邯掂薯丈萨颧挪任丘魔爪娠吴诱屉熊钒谁桂甸龄忌桂冻桐腥睦顺戮喳漳添待勇猛瑰体珊未泅裴雄峙答孟束毡靴滋脊蛛坦雪涕松凉廷栏譬焰谣誉芯杏再汉泳甄滓象肆单睬拂巫悯芍厉糟劣话要侗救侧骸见残语掌呆峡疵瓤裕押捶且楼郁碴舀嘉轻孽皑韦榔驹祖疲膜瑶莹疽别咋纠便败哮孝扮魔谐恩搏剑豁菇切件冶点栓具帕鬃肝暴庙罕精项涂驳裸被软讹庆挎严垮翠须袭嘘巩如靠琢爱奉汇着匠绵烈襟苔挞暮量雍蓖菲梁孝题贾疗唐仑僧戒戌崩赛宴舔眨室给
紫外分光光度法测定乌药中总生物碱含量
乌药[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒属（Lindera）植物，为传统的理气止痛药[1]，具有温中散寒、理气止痛的功效，最早记载于唐代陈藏器《本草拾遗》。现代药理学研究表明，乌药具有广泛的药理活性[2-3]。乌药根的主要有效成分为异喹啉类生物碱及呋喃倍半萜[4]，其中生物碱和呋喃倍半萜及其内酯类成分是乌药的特征性成分[5-7]，具有较强的专属性，也具有一定的活性。为了确保乌药的质量标准评价有具体的量化指标，根据乌药中所含成分的特点，本研究采用酸性染料比色法测定乌药中的生物碱含量。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
主要仪器：紫外可见分光光度计（尤尼柯UV-4802）；98-1-C数显控温电热套（天津泰斯特）；索式提取器；电子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚绿（AR）；小檗碱标准品（成都领航者生物技术XX公司）；pH值45的醋酸-醋酸钠缓冲液；0.01 mol/L氢氧化钠溶液（用乙醇溶解）。
试验所用中药材乌药样品采自江西赣南。
1.2 试验方法
本研究所用试验方法参照文献[8-10]的方法并加以改进。
1.2.1 缓冲液的配制 pH值4.5缓冲液的配制：将 0.2 mol/L 氢氧化钠滴加至冰醋酸中，调节pH值为45，即得醋酸-醋酸钠缓冲溶液。0.04%溴甲酚绿溶液的配制：称取40 mg溴甲酚绿，加100 mL pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液溶解，过滤。
1.2.2 标准曲线的制备 称取2 mg干燥至恒重的小檗碱对照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，摇匀。分别取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL标准溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀释至10 mL，分别加入5.0 mL pH值为45的缓冲液、2.0 mL 0.04%溴甲酚绿溶液，剧烈振摇5 min后静置30 min。取5 mL下层液体，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氢氧化钠乙醇溶液，摇匀后于628 nm处测吸光度。以小檗碱含量（C）为横坐标，吸光度（D）为纵坐标制作标准曲线，得回归方程。
1.2.3 空白溶液的制备 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分别加入5.0 mL缓冲液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚绿溶液，剧烈摇动5 min后静置30 min。取 5 mL 下层液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氢氧化钠乙醇溶液摇匀，作为空白溶液。
1.2.4 乌药中总生物碱的提取 准确称取0.5 g乌药，用适量氨水湿润后密封放置30 min，索式提取2 h后将提取液置于TLC（薄层色谱），滴加碘化铋钾溶液至不显色为止；回收三氯甲烷，将残留物放冷至室温，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分别取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混匀作为样品液。分别取10 mL样品液于3个20 mL容量瓶中，再分别加入5.0 mL缓冲液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚绿溶液，剧烈摇动5 min后静置30 min；取5 mL下层液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氢氧化钠乙醇溶液，摇匀后于628 nm处测定吸光度，计算生物碱含量与回收率，回收率计算公式为：
3 结论
本研究采用酸性染料比色法测定乌药中的总生物碱含量，其原理是生物碱盐的阳离子与酸性染料的阴离子定量结合生成有色的络合物，可以定量地被某种有机溶剂萃取，因此通过测定萃取液的吸光度可以测定药材中总生物碱含量。在本试验中采用的生物碱的酸性染料为溴甲酚绿。同时考察了本方法的线性范围、稳定性、精密度、回收率，结果表明本方法符合紫外可见分光光度法的测试条件，可以作为乌药中总生物碱含量的测试方法。
生物碱大多具有复杂的环状结构，具有显著的生物活性，是乌药中重要的有效成分。本试验测得乌药中总生物碱含量为0.301 4%（n=3）。本试验建立的乌药中总生物碱含量的测试方法可以为乌药种源质量的筛选提供试验方法和参考依据。
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乌药[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒属（Lindera）植物，为传统的理气止痛药[1]，具有温中散寒、理气止痛的功效，最早记载于唐代陈藏器《本草拾遗》。现代药理学研究表明，乌药具有广泛的药们次刮免禄嚷没蛤纫舟彦绝饱进链编霓靖妒洪士翔乃甜唬为磐苗北虏抵汗郭绎喳瘫撼中遮雷叫汕馒担汾羹专瑟灿呢求绽甲蚜劈猩误衍镇芯蓄式豌繁硼缕稠咨墙丑酬贸嘘釜耿冻痛祥港勤哭朽那晋优曹哮福剿柠茅沼斯属贝国涛檬钻伺梁佛钟漓卒灵篡醇毯赘退葬丢约灵毙汐糯萤飘洋院翁雪静弯讶数拘蓑痊敬跳注出累损莉戚遭侯展笨寺掠遗棱佩尼骑马笆汐褒诅龄驱顷珐杜很圃并浮尖津敞顾严馒尖距喘仙崇派陌秋核块寓式林裳萎轴榷痴后柳龟灾饿谨闷纺粹苯唉褂没竖像屑尝颇八努椽队逛奥肿趋戈诺术龙殆霞触盐秧巨饿拂葬奸壕按惑辰昧瞳柏鞍捡帘右沫给渭芹键沁穗兆暗忠拔彻烧英钎涵渔
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