篇一：标准微生物实验室建立参考方案 标准微生物实验室建立参考方案 依照生物安全管理基本准则及严格的无菌操作的要求，现提出针对我医院建立微生物实验室的参考方案供各位领导参考之用。微生物学实验室的布局应本着符合保护工作人员的健康，防止交叉感染，有利于样品送检和保证工作质量的要求，因此实验室应划分为3大区域，包括清洁区、操作区和无菌区，现初步统计建立微生物实验室共需要6间房间（不包括将来可能要开展其他项目所需要的房间），一侧为挨着的4间，其中1间用于标本接收、验收及报告单存放处；1间用于标本接种、培养、涂片染色及作各类实验之用；1间用于上机鉴定、药敏实验、存放培养基以及相关试剂和报告打印之用；最后1间为缓冲区域同时可兼作更换实验室专用工作服之用。另一侧为挨着的2间，其中1间可分隔开，半间作为处理实验完毕后标本等污染品的高压灭菌区；另半间用于日后作为艾滋病实验室，另1间则作为独立的办公休息区（为了避免发生院内感染及其他危险因素的产生，微生物的办公休息区域应与检验科的分开）。 下面提出具体的室内布局要求，标本接收、验收及报告单存放室内需在相对侧摆放两组桌子（一组用于接收标本、另一组放报告单），并且与隔壁培养室相邻的墙上要有专门的标本传送窗口。标本接种、培养室和鉴定、试剂存放室不独立开门，须与鉴定、试剂存放室和缓冲间相通（相通的房间相当于两道缓冲区，要在相通处设门），缓冲间独立开门。标本接种、培养室内需布置1~2组洁净工作台（台面要求由无化学、无生物毒性、易消毒、易清洗、抗腐蚀、抗吸污、防水的光滑材料制成）且工作台应装台灯或固定于桌面的白炽灯管，用于显微镜使用、肉眼观看细菌溶血现象、玻片凝集反应、测量纸片法药敏试验的抑菌环等，其次因季 节变化等其他因素的影响有时可能会使室内温度偏差从而造成不必要的试验的失败，建议在培养室内安装空调一部用于平衡室内温度，微生物学实验室要求至少应有2个洗手水池，最后就是要在工作台的一侧安装一个洗手水池作为染色和工作之用（该洗手池应采用感应式或脚踏控制的龙头，在水池上方安装干手器一台）。上机鉴定、药敏试验、存放培养基以及相关试剂和报告打印室需要冷藏箱一台存放各类培养基及试验试剂，为了能够更好的开展实验室的工作（血液、脑脊液、胸腹水、关节液等无菌体液的细菌培养），需要添加一台全自动血液培养仪和配套的血培养瓶用于各类无菌体液的增菌培养，其可与鉴定仪一并摆放于本室，本室也须安装空调一部。缓冲间同时也可作为换衣间，来到缓冲间可在此更换实验室要求的专用防护服、一次性的帽子、口罩、手套、鞋套等，所以室内需要衣橱或者衣柜一个用来放无菌、干净的工作服等，其次是要在靠近门口附近的位置安装一个洗手水池作为操作人员离开实验室前洗手之用（该洗手池应采用感应式或脚踏控制的龙头，在水池上方安装干手器一台）。如果条件允许的话此房间可分开占用2个房间，如不能分开的话就请把此房间分隔开，半间作为处理实验完毕后标本等污染品的高压灭菌室，室内需配备高压灭菌器或医用手提式高压蒸气锅一台，而且要保证室内的通风良好；另半间则可留于日后作为艾滋病实验室。 以上所述的5间房间最后有个统一要求：微生物学实验室的每一个工作区都应安装紫外灯，由于紫外线的消毒仅限于物体直射表面，所以合理的高度应距离桌面1m且要求选择紫外线波长在250~265nm的灯管；实验室内应少灰尘所以不能铺设地毯，地面材料应具有耐清洗、耐消毒、防滑的性能；墙面也应符 合便于清洗、消毒、不易吸附、光洁的原则；实验室的入口处应张贴生物安全防护级别的标志用于警告和提醒。 微生物实验室由于其的特殊性及危害性，为了避免发生院内感染及其他危险因素的产生，故提出要求有自己独立的办公、休息区域（希望能够与检验科的分开）。 注：附有参考图 走 廊 篇二：微生物实验方案 实验器材 原料：醪糟： 1.2主要培养基 pDA（马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基）培养基；YpD培养基（酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基）；高盐察氏培养基；普通营养琼脂，Lb琼脂培养基 1.3仪器 超净工作台、恒温干燥箱、恒温培养箱、光学显微镜，培养皿，三角瓶，无菌枪头，平板，接种环，无菌生理盐水试管 2试验方法 2.1培养基配制及培养条件 2.2菌种的分离纯化 2.2.1菌种的分离方法 无菌操作称取样品1g，放入盛有99mL无菌水的三角瓶中，振摇1-2min，浸泡数分钟后再振摇1-2min，使样品与水分充分混合，将菌分散。使用无菌枪从原菌液中吸取1mL样液注入盛有9mL的无菌水的试管中，以此类推，制成10-3、10-4和10-5稀释度的样品溶液。用无菌枪分别从中稀释度的试管中吸取1mL放入pDA、YpD、Lb琼脂培养皿中，在培养基未凝固前（37℃）快速将样品液摇匀，同时制作空白，每个稀释度制作三个平板，将平板倒置后放入28℃培养箱中培养。 2.2.2菌种的纯化方法 培养3d后观察平板内菌落，按其形态进行初步分类，挑选典型菌种的单菌落2-3个，酵母菌采用划线法接种于琼脂平板，霉菌采用点种法接种于pDA平板，经过多次分离后菌种得到纯化。 革兰氏染色实验步骤 1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基：1.先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。 4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。 7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。 9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束 2.2.3菌种的保藏 经分离纯化后的优势纯培养菌种，为了做菌种鉴定及后期的产品试验，必须进行有效保藏，防止菌种退化或变异。霉菌的保藏方法；用点种法接种于pDA平板上，48h后观察，看到菌丝生长并在平板上延伸时，用接种环挑取菌丝接种于pDA斜面试管中，在28℃培养箱中培养3-4d，待产生孢子后用牛皮纸扎好存储于4℃冰箱中待用。 2.2.4优势菌种的确定 采用平板菌落计数统计样品微生物菌落数并用血球计数板进行活菌总数计数，依据数据确定出优势菌种。 2.2.5菌种的初步鉴定 2.2.5.1霉菌的初步鉴定 （1）菌落特征观察 用以无菌接种方式挑取测试菌株少量孢子，以三点接种法点接于pDA培养基上。每个稀释度菌种重复2个平皿，倒置于28℃下培养4-7d。观察各菌种的菌落特征，包括颜色、质地、高度。 （2）镜检 培养物直接镜检：在长有上述菌株的平板上挑取少量菌株制片并置于低倍显微镜下，分别观察它们的孢子囊梗的形状排列、着生位置、分支情况及孢子囊的形状，并注意有无假根等特征。接合孢子观察方法：用无菌接种环挑取测试菌株的少量孢子或菌丝，分别以“八”字形排列划线接种在同一pDA培养基平板的两侧，倒置于28℃培养4-5d。培养物制片观察：制片介质为乳酸苯酚液。 活体观察法：用接种针挑取少量霉菌菌丝于载玻片上，快速滴一滴pDA培养基，让菌丝均匀分布，盖上盖玻片，放入大培养皿中置于28℃培养箱培养，每天观察。 2.2.4.2酵母菌的初步鉴定 （1）菌落特征观察 将菌种用划线法接种到YpD培养基上，每个稀释度菌种重复两个平皿，倒置于28℃下培养3-7d，观察各菌落形态、颜色、边缘形状、隆起度。 （2）镜检 培养物直接镜检：将长有上述菌株的平板挑取少量菌丝用水浸法制片并置于低倍显微镜下观察酵母菌细胞形状、有无出芽、芽体形状大小、子囊孢子形状是否有结合现象。 酵母假菌丝的观察：将已活化好的酵母划线于YpD琼脂培养基平板上，每个平板划2-3条，在菌线上盖以无菌盖玻片，28℃培养5-10d。镜检是否有假菌丝。酵母菌活体观察：将已活化好的酵母用接种针挑取少量于载玻片上，快速滴一滴YpD培养基，让菌丝均匀分布，盖上盖玻片，放入培养皿中置于28℃培养箱培养，每天观察记录。 培养基的制备pDA（马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基）培养基；。 配料：马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然ph (1)称量和熬煮[1] 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。适用于酵母，霉菌， YpD培养基（酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基）； 溶解10g酵母菌，20g蛋白胨与900ml水中再加20g琼脂粉，高压121摄氏度下灭菌20min,加入20g葡萄糖（葡萄糖溶液灭菌后加入）适用于酵母 高盐察氏培养基； 成分 氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，氯化钠60g，蔗糖30g，琼脂20g，蒸馏水1000mL 制法加热溶解，分装后，115℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。适用于分离霉菌 普通营养琼脂 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100g琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7.6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。适用于微生物生长 Lb琼脂培养基配制每升培养基 应该在950ml去液态lb培养基离子水中加入：胰化蛋白胨10g酵母提取物5gnacl10g摇动容器直至溶质溶解。用5mol/Lnaoh调ph至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。 1.Lb固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗固态Lb培养基生素，并且倒好板。Lb固体培养基倒板 1。配制：100mlLb培养基加入1.5g琼脂粉 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的Lb固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。 3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。配400ml的话成分按比例减少就行了，ph还是要按规定的。适用于细菌培养 酵母菌在厌氧条件下能分解糖类，产生各种有机酸、气体和其它产物。酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异。因此，这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据。酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫（ph6.8-5.2由紫变黄）或溴麝香草酚蓝（ph7.6-6.0由蓝变黄）指标剂颜色的改变来确定。产气可由发酵管气泡的产生予以证实。（三）材料 糖发酵基础液（见附录I），1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液（见附III），葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖，啤酒酵母斜面菌种。 四）实验内容 1、糖发酵基础液配制好后，按培养液容量的1%加入糖，分装于杜氏发酵管中（培养液的高度约为4-5厘米），再在试管内加入倒置的小玻管（约0.4×2.0－2.5厘米）一支。每种糖设三个重复管，121℃高压灭菌15分钟。 2、将啤酒酵母分别接入上述各发酵管中，置30℃下培养48-72小时，另以不接种者作对照。 3、如产酸则培养液ph值下降而变黄色；如产气，则必先产酸，并在杜氏小管顶端出现气泡。 4、结果记录。以“”表示产酸，“0”表示产气，“＋”表示产酸产气，“－”表示无变化，“碱”表示产碱。 篇三：污水微生物实验室方案 微生物实验室建设方案 微生物实验室实验区域面积约为25平方米。工程范围：在原有建筑结构的基础上进行，项目包括实验室台柜，实验室的装修改造和实验室的净化工程。结合实验室的设计要求和规范作出方案。 本项目共包含下列功能室： 准备室：该实验室为检测样品的前处理室，包括实验前期的消毒灭菌、培养基的制备和后期的样品的培养。 更衣室：进入洁净操作区前的更衣和风淋。 缓冲室：阻隔清洁区和非清洁区的缓冲区域。 洁净室：设计净化级别为万级，局部百级。局部百级的环境由一台超净工作台 提供。 上述所有洁净区采用一台风冷式管道空调机组送风，经过初、中、高三级过滤对净化室进行净化空气的处理。送风方式采用顶送，侧下回风的方式。 实验室结构与装饰 从节能、保温角度考虑实验室的围护及吊顶结构采用厚度为50mm的净化实验室专用聚苯乙烯夹心复合彩钢板（优点是重量轻、机械强度高，隔热、隔音、防潮性能好，平整光滑，耐腐蚀、易清洁消毒，防水，安装方便；所有缝隙可靠密封，防震、防火），彩色涂层钢板为0.426mm厚优质钢板，夹芯采用12kg/m3聚苯乙烯。顶棚及板壁的墙角处和墙与地面、墙与吊顶采用圆弧阴阳过渡并封闭。所有配套铝合金型材均采用优质喷塑型材（厚度不小于1.2mm），以防止实验室以后消毒时导致铝材氧化， 地面工程： 实验室地面采用pVc地胶板，该材料具防腐蚀、防滑，易清洁等特点：定向彩色设计、颜色表里如一。其表面结构致密、耐磨，易于维护。该地面材料符合en649(34-43)的质量标准，其耐磨程度达到K5(p类)适合于行人流量大的场所使用。 实验室照明灯具：实验室照明均采用专用洁净室照明灯具（不锈钢斜边型吸顶式带罩密封灯具）。特点:镜面全内胆，照明度强，不锈钢边框年久不腐蚀，外形美观。密封性好、抗干扰、不积尘、易清洁。 实验室消毒灯具：实验室灭菌灯采用紫外线杀菌灯。 压力显示系统：实验室设压力显示值，提醒实验工作人员。 实验室物品进出：实验操作所需的物品、器械等通过前处理室与微生物室操作间相连的不锈钢传递窗（窗内带消毒灭菌灯）进入。实验废弃物及污染物通过不锈钢传递窗递出。在准备室内的高压消毒锅消毒处理。 实验室给排水系统：实验室操作区水池安装水龙头，洗手池下水用封闭管道接至共用污水处理池经消毒处理后排放。 配电系统形式及配置：系统形式为220V/380V电源配电系统，采用专用馈线供电。设总配电箱一台，控制送风风机、空调、实验室照明、插座。各洁净区域照明全部采用气密式净化灯具，吸顶安装。 空调系统：洁净室采用一台制冷量7.0Kw/制热量7.5Kw的风冷热泵分体风管式净化专用空调机组，采用顶送侧下回的气流组织方式，未端加装高效过滤器来达到各实验室的洁净级别，满足实验室冬、夏季冷热负荷。净化实验室用电总功率为10Kw。 室内各用电点位置及高度在施工时按要求调节。其它各电气线路均穿阻燃pVc管敷设在彩钢板吊顶上和夹芯层内。
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