#专题研究#C57BL/6小鼠C IA模型的建立及其监测体系的初步筛选¹710032西安第四军医大学西京医院临床免疫科贾俊峰º李晓燕º朱平»王彦宏樊春梅赵雯摘要目的建立稳定的C57BL/6小鼠胶原诱导关节炎(CIA)模型,构建进一步进行类风湿关节炎(RA)发病机制及治疗研究的体系。方法取40只雄性C57BL/6小鼠,随机分为模型组和对照组。模型组采用鸡II型胶原与完全弗氏佐剂在尾部皮内注射,21天后同样方法加强免疫。定期观察两组小鼠的关节和关节外表现以及病理学改变;用三重免疫荧光标记、胞内细胞因子测定流式细胞术检测外周血T细胞亚群。结果对照组小鼠均未发病。模型组小鼠在50天的发病率达70%,关节炎评分在3~8分,持续时间大约100天;病理切片显示典型的炎性细胞浸润,滑膜增生,软骨及软骨下骨破坏;外周血T h1/T h2比值升高。结论应用Ò型胶原能在C57BL/6小鼠上成功建立CIA模型,该模型是进行RA研究的良好动物模型。关键词C57BL/6小鼠;关节炎,类风湿;Ò型胶原诱导的关节炎;疾病模型,动物中国图书资料分类号R593122;R332R eplication of collage n ind uced arthritis in C57B L/6m iceJia Junfeng,Li Xiaoyan,Zhu Ping et al.Department of Clinical Immunology,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi.an710032,ChinaA bstract Objectiv e To repli cate a model of typeÒcollagen(CÒ)induced arthritis i n C57BL/6mice.M ethods C57BL/6mice were immu-nized by intradermal injecti on at the base of the tail with chick typeÒcollagen and complete Freund adjuvant emulsion,followed by another injecti on 21days later.M anifestati ons of j oint ailment,pathological examination,and T cell subtypes detected by FCM were observed.R esults In compari son with control mice,the C57BL/6mice developed CIA with high i ncidence(70%)and severity after immuni zati on.Hyperplasia of the synovium and i nflammatory infiltration were observed.The percentage of T h1cel ls in the peripheral blood of the mice was signifi cantly increased i n the peripheral mononucl ear cell s(PBMC).C onclusion T he CIA model of C57B L/6mice and the platform its study were successfully established.Key words mi ce,C57BL/6;arthri tis,rheumatoi d;typeÒcollagen induced arthriti s(CIA);disease models,ani mal胶原诱导关节炎(collagen induc ed arthritis,CIA)模型是一种免疫炎症模型,CI A的特征是多发性关节炎,发病机制和病理特征与人类风湿性关节炎(rheumatoid a rthr-i tis,RA)类似。CIA的建立极大地推进了RA发病机制、治疗等方面的研究。目前对RA发病机制的研究已深入到蛋白质及基因水平,需要进一步明确分子及酶类在自身免疫反应各环节中的精确作用[1],建立稳定的CIA模型及检测体系对RA研究具有重要意义。早期的研究表明,不同品系小鼠对于CIA的易感性与H-2单倍型有关,H-2q或H-2r单倍型较易患CI A;新近国外研究表明, H-2b单倍型小鼠系亦可以在Ò型胶原蛋白(collagenÒ,CÒ)作用下产生CIA[2]。故本试验采用C57BL/6小鼠(H-2b 单倍型)建立CI A模型,并进行了系列研究。1材料与方法111实验动物近交系C57BL/6(H-2b)小鼠40只,雄性,4~5周龄,体重15100?0132g,由第四军医大学实验动物中心提供。三级环境实验观察。随机配对分为CIA 模型组20只,对照组20只。112主要试剂与器材鸡Ò型胶原蛋白、弗氏完全佐剂(complete Freund c s adjuvant,CFA)购自美国Chondrex公司;抗小鼠CD4-PE/CY5、IFN-C-FITC、IL-4-PE及同型对照抗体均购自美国Biolegend公司;佛波酯(PMA)、离子菌素(Ionomycin)、莫能菌素(Monensin)购自美国Sigma公司。匀浆器为德国IKA公司产品;流式细胞仪为美国BD公司产品。113方法11311模型建立方法CÒ溶解于0105mol/L冰醋酸中,浓度为2mg/ml,将溶解的胶原与CIA等体积混合,冰浴中使用匀浆器充分乳化。免疫动物时,在小鼠尾根部多点皮内注射011ml乳剂(含100mg CÒ和200mg结核分支杆菌)。基础免疫后第21天以同样方法重复,避开初次免疫部位,进行加强免疫。同时,对照组用C FA与0105mol/L冰醋酸等体积充分乳化后按上述方法进行免疫及21天加强免疫。11312关节和关节外病变观察及关节炎评分各关节病变程度按5级评分法[3]。/00:无红肿;/10:关节红不肿;/20:关节轻度红肿;/30:关节中度红肿;/40:关节重度红肿伴功能障碍。关节炎分数(arthritis score,AS)为每只小鼠所有病变关节分数的总和,最高分为16分。各剂量组所有小鼠关节炎分数之总和除以该组小鼠的只数,即为该组平均关节炎指数(mean arthritic index,贾俊峰,硕士生。主要从事类风湿关节炎发病机制和治疗的研究。¹国家/8630计划资助课题(编号2001AA215061)。º共同第一作者。»通信作者#472#解放军医学杂志2004年6月第29卷第6期M e d J Chin PLA June2004Vol29No6
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