一、 实验目的
1. 掌握滴定法测定氨基酸总量的原理
2. 了解电位滴定法确定酸碱滴定终点原理
3. 熟练使用酸度计。
二、 实验原理
氨基酸含有酸性的一 COOH,也含有碱性的一 NH2。它们互相作用使氨基 酸成为中性的内盐。加入甲醛溶液时,-NH2与甲醛结合,其碱性消失。这样就 可以用碱来滴定一 COOH,并用间接的方法测定氨基酸的含量。将酸度计的玻璃 电极及甘汞电极(或复合电极)插入被测液中构成电池,用碱液滴定,根据酸度计 指示的pH值判断和控制滴定终点.
三、 仪器与试剂
1. 仪器
酸度计、复合玻璃电极、磁力搅拌器 烧杯(200mL)微量滴定管(10ml)
2•试剂
1 20%中性甲醛
2 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液
3 pH=6.18标准缓冲溶液
四、 实验步骤
1. 仪器校正:
开启酸度计电源,预热30分钟,连接复合电极。选择适当pH的缓冲溶液, 测量缓冲溶液的温度,调节温度补偿旋钮至实际温度。将电极浸入缓冲溶液中, 调节定位旋钮,使酸度计显示的 pH值与缓冲溶液的pH值相符。校正完后定位 调节旋钮不可再旋动,否则必须重新校正。
2. 样品处理
准确称取约5.0g酱油试样,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸 取20.0mL,置于200mL烧杯中,加60mL水,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准 溶液[c( NaOH)=0.050 mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗氢氧化钠标准 滴定溶液(0.05 mol/L )的毫升数,可计算总酸含量。
3. 氨基酸的滴定
在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.0mL甲醛溶液,混匀。再用氢氧化钠标 准滴定溶液(0.05mol/L)继续滴定至PH9.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液
(0.05mol/L)的毫升数(Vi)。
4. 空白实验
同时取80mL蒸馏水置于另一 200mL烧杯中,先用0.05mo1/L氢氧化钠标 准溶液滴至pH8.2(此时不记碱消耗量),再加入10.0mL中性甲醛溶液,混匀。 用0.05mo1/L的氢氧化钠标准溶液继续滴定至 pH9.2,记录消耗氢氧化钠标准溶 液的体积(V2)。此为试剂空白实验。
五、计算
(V’ 一V 2)汉 c疯 0.014
氨基酸态氮( % )= - - 100
m 汉 20 /100
式中:Vl—样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点 (pH9.2 )所消耗的氢氧化
钠标准溶液的体积,ml;
V2—空白实验在加入甲醛后滴定至终点 (pH9.2 )所消耗的氢氧化钠
标准溶液的体积,ml;
c—氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L ;
m—测定用样品溶液相当于样品的质量,g;
0.014—氮的毫摩尔质量,mg/mol。
六、说明
不应过长,否则将直接影响到滴定终点,最终导致检测结果的不准确
2. 久置的复合电极初次使用时,一定要先在饱和 KCl中浸泡24 h以上
3. 本法准确快速,可用于各类样品游离氨基酸含量测定。
4. 对于混浊和色深样液可不经处理而直接测定。
本文来源:https://www.2haoxitong.net/k/doc/a0ae6f13091c59eef8c75fbfc77da26925c596a5.html
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