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小鼠阴道涂片技术及其染色方法的研究

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376JournalofHunanUniversityofChineseMedicine
湖南中医药大学学报
圆园18年4月第38卷第4期Apr.圆园18灾燥造援38晕燥援4
本文引用院肖小芹袁汤婉婷袁成绍武袁邓桂明.小鼠阴道涂片技术及其染色方法的研究[J].湖南中医药大学学报袁2018袁38渊4冤院376-378.
小鼠阴道涂片技术及其染色方法的研究
渊1.湖南中医药大学袁湖南长沙410208曰2.湖南中医药大学第一附属医院袁湖南长沙410007冤
也摘要页目的比较研究棉签法尧生理盐水冲洗法进行阴道涂片袁HE染色法尧瑞氏染色法尧巴氏染色法染色对C57BL/6小鼠阴道涂片细胞组织染色的效果袁为小鼠动情周期的确定寻找便捷尧有效的检验方法遥方法对10只C57BL/6雌性小鼠分两笼饲养袁每日10颐00用棉签法尧生理盐水法进行阴道涂片袁连续15d袁并使用HE染色法尧瑞氏染色法尧巴氏染色法袁观察记录遥结果连续实验生理盐水法优于棉签法袁HE染色染料易于获得曰瑞氏染色分型清楚袁染色佳曰巴氏染色形态清晰袁分色明显袁透明度好遥结论大样本量旨在判断动情周期的发生与改变实验应采用瑞氏染色法袁可辅以巴氏染色以增强实验动物数据资料的可靠性遥
也关键词页C57BL/6曰动情周期曰阴道涂片曰HE染色曰瑞氏染色曰巴氏染色也中图分类号页R34
也文献标志码页A
也文章编号页doi:10.3969/j.issn.1674原070X.圆园18.04.003
肖小芹1袁汤婉婷1袁成绍武1袁邓桂明2*
StudyofVaginalSmearandStainingMethodsofMice
XIAOXiaoqin1,TANGWanting1,CHENGShaowu1,DENGGuiming2*
(1.HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha,Hunan410208,China;2.TheFirstAffiliatedHospitalofHunan
UniversityofChineseMedicine,Changsha,Hunan410007,China
也粤遭泽贼则葬糟贼页ObjectiveTocomparethestainingeffectofHEstaining,WrightstainingandPapstainingonthecellsmear
ofC57BL/6mice,andtofindarelativelysimpleandeffectivestainingmethodforidentificationofestrouscycle.MethodsThe10femaleC57BL/6miceweretakenvaginalsmearat10:00everymorning,withthecourseof15days.Theresultswerethanswabmethod.HEstainingmethodwassimpleandeasy.Wrightstainingmethodwasclearwithobviouscolorseparation.examinationofmicevaginalsmearforestimatingthedevelopmentofestrouscycle.ThereliabilityofexperimentalinformationcanbesupplementedbyPapanicolaoustaininingmethod.
也运藻赠憎燥则凿泽页C57BL/6;estrouscycle;vaginalsmear;HEstaining;Wrightstaining;Papanicolaoustainining
analyzedbyHEstaining,WrightstainingandPapanicolaoustaininingmethods.ResultsThenormalsalinemethodwasbetterPapanicolaoustaininingwaswithgooddiaphaneity.ConclusionTheWrightstainingmethodisfirstlyselectedinlargesample
变化是评价生殖系统功能的一项重要指标袁其性周期一般为4~6d袁可依据动物的性表现及生殖器官及动情间期[2]遥小鼠生殖及内分泌系统随性周期发
也收稿日期页2018-01-07
应用于生殖系统相关疾病研究[1]遥小鼠动情周期的
小鼠作为常用的实验动物之一袁雌性小鼠广泛生一系列组织尧生理学变化袁进而体现在阴道细胞形态及比重的改变袁因而袁阴道涂片可简便快捷的体现动情周期而成为目前常用的判定小鼠性周期情较为暴躁袁现有文献所述阴道涂片技术实际操作的方法之一[3]遥但C57BL/6成年雌鼠体质量较小袁性
变化将动情周期分为动情前期尧动情期尧动情后期
中存在一定问题袁文献记载染色方法缺乏直观对
也基金项目页湖南省中医科研计划重点项目渊201815冤曰湖南省教育厅项目渊17C1219冤遥也作者简介页肖小芹袁男袁博士袁教授袁研究方向院中西医结合基础研究遥也通讯作者页*邓桂明袁女袁博士袁副主任药师袁E-mail院guimingd1004@163.com遥

第4期肖小芹袁等小鼠阴道涂片技术及其染色方法的研究377
比袁本试验对C57BL/6小鼠阴道涂片方法进行优化袁并对常用的三种染色方法进行比较研究袁旨在建立快速尧简单尧可靠的阴道涂片方法遥
11.1
材料与方法
1.1.1材20g袁性成实验动物
料熟的C57BL/6选取雌54~58鼠10日只龄袁SPF袁体级质量袁由湖南
18~
斯莱克景达实验动物有限公司提供渊实验单位使用渊许可证编号院SYXK(湘2013-0005曰许可证号院SCXK
1.1.2
湘冤2016-0002为45%~55%饲养条件
冤遥袁明暗室周期内温度为为12/1223~27h袁分两益袁笼相饲对养湿度
袁试验期间自由饮用灭菌纯化水渊灭菌方法院经121益灭
菌1.1.3
30min镜渊北京器城夕材袁有与效科试剂
期14d冤袁食用标准普通维持饲料遥技有限公司OLYMPUS冤遥灭CH30菌牙签型光袁无学显菌脱微
脂棉球袁10滋L移液枪尧10滋LTip头尧玻片渊载玻片尧盖玻片冤尧医用生理盐水遥Ehrilich苏木素液[4]木素2g溶于100mL纯乙醇袁再将15g钾明渊将矾苏溶于100mL蒸馏水中袁溶解后将甘油倾入混合袁然后加入苏木素乙醇混合液袁最后加入10mL冰醋酸袁充分混匀后暴露在日光下自然成熟3个月冤袁伊红染渊液Wright[伊红冤Y染渊水液溶冤0.5~1g袁蒸馏水99mL混匀]袁[5]渊瑞氏染料粉1g放入研钵内袁加瑞中氏
性甘油10mL袁研磨至细糊状时袁慢慢加入600mL甲醇袁充分溶解袁移至棕色瓶内1周后即可使用冤袁磷酸盐缓冲液渊10g/L磷酸二氢钾30mL袁10g/L磷酸氢二钠20mL袁蒸馏渊水加至品牌院Solarbio1000袁mL货号冤袁院巴氏G1612染色冤遥
液1.2
PapanicolaouEA36每方日法
10:00对两笼小鼠分别使用自制棉签法及
生理盐水冲洗法进行阴道涂片袁并进行HE染色尧瑞1.2.1
氏染色及处剪去阴巴氏袁从道脱涂片
染色遥
脂棉球自制上撕棉签取2法[1]cm院伊将2牙签顶cm大小端棉絮尖锐
袁折叠缠绕于牙签顶端遥将自制棉签于生理盐水中浸湿袁插入小鼠阴道约5mm袁顺牙签缠绕方向旋转1周后取出袁顺牙签缠绕方向于清洁载玻片上滚动1周遥自然干燥玻片遥
生理盐水冲洗法[6]
Tip院取道约头5后mm袁吸取袁吹10打2~3滋L生10滋L移液枪袁装10滋L
次理后盐吸出水袁将10枪头微升插袁滴入小至鼠载阴玻
1.2.2
片袁均匀HE铺开染至色
1.5阴cm道涂片伊2cm自然左右干袁燥自然后浸润干燥苏木玻片素
遥
染渊蓝根据液染5min涂片染蓝色5~10曰伊红染色min液的曰染深流浅水色确冲洗3定min时曰曰间盐流冤曰酸乙水冲洗自醇来分曰水色干浸泡返数秒燥袁封
片袁镜检[4]1.2.3
遥剂数滴瑞渊按氏涂片染色
面积阴大道小涂片而定自然冤袁静干置燥1后min滴加渊瑞如氏天染
气炎热袁时间应缩短袁以防止染液干涸遥若染液挥发袁表面趋于干燥袁应即增添染液冤曰加相当于染液1.5倍的磷酸渊冲洗盐缓时冲应液将袁玻片与染平液混放袁缓缓匀袁保持加水约袁切10勿先min倾曰去流染水料冲洗则涂片易残留染料沉淀物冤曰袁否
1.2.4
乙阴道涂片自然干燥后放入95%
70%醇乙固醇定巴氏23~5染色
干燥袁封片袁镜检[7]遥minmin曰流曰水85%冲洗乙醇曰放2入min染色试剂曰80%乙盒醇内2Amin院苏
曰木C素染色5min曰流水冲洗曰B院蓝化液蓝化5min曰EA36院G6染液染色5min曰入95%乙醇分色数秒数曰秒D院干燥袁封染片液袁染镜色检5遥渊min此方曰法两在次染95%色试剂乙醇盒分附色说明各书基曰
础上根据试验情况进行了优化冤遥
22.1
结果
连阴续道多涂片日采方集法阴的道选涂片择
后袁棉签组小鼠阴道口
明显红肿袁且操作速度相对较慢遥移液枪组小鼠阴道口未见红肿袁操作过程中未见阴道出血袁且操作速度较2.2
快遥细胞HE染核色
被苏木素染成蓝紫色袁角化细胞尧细胞浆尧
嗜伊红颗粒等被伊红Y染成不同程度的粉红色袁白2.3
细胞分瑞叶氏核染较色
明显遥如图1遥
细胞核被苏木素染成深蓝紫色袁角化细胞尧细胞浆等被染成不同程度的浅蓝紫色袁白细胞分叶核较明显遥如图2遥
2.4
细胞巴氏核染被色
染成深蓝色袁完全角化细胞胞浆染成橘黄色袁不完全角化细胞被染成不同程度的粉红色袁中间层尧基底层表皮细胞被染成青色尧蓝色袁白细胞被染成蓝色且分叶核明显袁形态结构清晰遥如图3遥
3讨论
通过取材尧染色尧镜检分析袁就阴道涂片方法而言袁移液枪生理盐水冲洗法简便尧高效袁涂片污染少袁新手易于操作遥就阴道涂片染色方法而言袁HE染色法技术成熟袁染料易于获得袁镜下动情间期易于辨

378
湖南中医药大学学报http://qkzzs.hnucm.edu.cn圆园18年第38卷
间A.散角在化白的细胞上皮袁细胞白细胞细胞染成粉红核色分袁叶且明显无细胞渊伊400核渊伊冤曰400C.未冤曰完B.全角角化细胞化的上皮细胞尧中间层细胞可见核被染成蓝紫色渊伊400冤曰D.低倍镜下
细胞边界清晰袁分型清楚袁染色佳渊伊100冤
图1HE染色结果
A.B.角未白化完细胞的上全角着皮化色细胞的明显染上皮袁细胞核成形均尧态匀中清透间晰明的层渊伊细胞400蓝紫冤曰色袁C.袁其角且核化无被上细胞染皮成中核渊伊400冤曰深可蓝见紫部分色渊伊
400冤曰D.低倍镜下细胞边界清晰袁分型清楚袁染色佳渊伊100冤图2瑞氏染色结果
别袁但对角化细胞及中间层细胞区别较弱袁取材部位过深易误判为动情前期或后期曰瑞氏染色法步骤简略袁操作便捷袁省量节能袁镜下动情期尧动情间期明显袁动情前期杂质易染色袁故易于判断袁但对鳞状上皮细胞角化程度区别度较小袁取材部位对动情周期判断影响较小遥巴氏染色对不同的细胞及不同分化程度的角化细胞染成不同颜色袁分色明显袁透明度好袁便于鉴别尧区分动情分期袁且可排除取材过深的影响袁实验结果准确袁但操作较前复杂袁成本较高遥
A.细胞完全核角渊伊化400的冤曰上B.皮未细胞完全染角成化均的匀上透皮明细胞袁不同被深染浅成的不橘同色程尧度黄的色粉袁且红无
色渊伊蓝400色袁冤曰白C.细胞分中间层叶尧结基构底清层晰细胞胞渊伊400冤曰浆D.被低倍染成镜青下尧蓝各色种形袁其态核细胞被染袁成巴氏
深染色细胞边界清晰袁分型清楚袁各期明确袁染色效果佳渊伊100冤图3巴氏染色结果
综上袁长时间连续涂片应采用生理盐水冲洗法进行阴道涂片取材遥实验样本量大袁旨在判断动情周期的发生与改变可应用瑞氏染色法曰实验样本量小袁旨在明确动情各期改变袁或对阴道脱落细胞形态尧比率进行研究时应采用巴氏染色法遥临时染色尧准确度要求较低时可采用HE染色法袁但需注意采用棉签法袁且取材不宜过深,防止细胞混杂遥参考文献院
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渊本文编辑李杰冤

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