上游法和密度梯度离心法处理精液行IUI临床妊娠率分析

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上游法和密度梯度离心法处理精液行IUI临床妊娠率分析
摘要】目的:回顾分析应用两种方法处理精液对IUI临床妊娠率的影响。方法:采用上游法和密度梯度离心法处理精液，用处理后的精子悬液行IUI。结果:两种处理方法IUI临床妊娠率无显著性差异(P>0.05。结论:两种方法处理精液对IUI的成功率无显著影响。
【关键词】精液处理宫腔内人工授精妊娠率
【中图分类号】R714 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）19-0183-02 宫腔内人工授精(IUI是用非性交的方式，将精子置于女性子宫，使精子和卵子自然结合，达到妊娠的目的，是不孕症的治疗方法之一。行IUI的男性精液标本需要预先在体外进行优化处理，目前常用的精液处理方法主要有上游法和密度梯度离心法两种。本文回顾分析总结45例不孕夫妇的男性精液用不同处理方法行IUI的妊娠结局，现将资料分析报道如下。 1 资料与方法 1.1 研究对象
选取2012年1月至2013年12月因不育来我所不孕不育科就诊并接受IUI治疗的夫妇共45例，共86个周期，平均年龄32.03岁，平均不孕年限4.69年，原发不孕28人，继发不孕17人。女方进行IUI治疗前，均进行妇科检查，内分泌检查，输血前八项检查，输卵管碘油造影检查证实至少有一侧输卵管通畅，对男方精液进行常规检查2-3次，排除严重少，弱精子症及死精子症等患者，B超监测女方排卵，于预测排卵前行IUI。 1.2 精液标本采集
患者禁欲2～7d，用手淫法收集全部精液于干燥无菌的广口杯，置于37℃孵箱中，待其完全液化后，按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第4版的方法进行检测。 1.3 精液处理
处理精液的培养液为Vitrolife公司的SpermRinseTM和SpermGradTM试剂。①上游法处理精液的程序为：在Falcon2095离心管中加入1～2ml液化精液，并混匀。在精液上方缓慢加入2ml SpermRinse，将离心管倾斜放入37℃ 5% CO2培养箱中培养60分钟以上。然后轻轻将试管竖直，取出上层的1.5ml左右液体放入离心管中。然后加入2ml SpermRinse，500g离心5分钟。去除上清液，加SpermRinse 0.5-1.0ml重新悬浮精子小丸。②密度梯度离心法处理精液的程序为：取SpermRinse和SpermGrad预热至37℃。将9ml SpermGrad与1ml SpermRinse充分混匀制成90%的梯度分离液，将4.5ml SpermGrad与5.5ml SpermRinse充分混匀制成45%的梯度分离液。在Falcon2095离心管内，依次放入90%和45%的梯度分离液各1ml。在45%的梯度分离液上方放入1-2ml液化精液。离心500g 20分钟。小心移去精液和梯度分离液，加入2-3ml SpermRinse，混匀。离心500g 5分钟。悬浮精子小丸在1ml SpermRinse中，离心500g 5分钟。小心移去所有上清液，加入0.5-1.0ml SpermRinse，混匀，待用。 1.4 IUI手术操作
患者排空膀胱后取截石位，用生理盐水棉球和干棉球擦洗阴道后，用一次性专用IUI授精管吸出处理好的精子悬液0.5 ml，通过宫颈插入宫腔，缓慢将精液推注，注射完毕后停留1min拔管。术后患者抬高臀部卧床休息30min。

1.5 临床妊娠判断
患者IUI后14天来抽取静脉血查β-hCG，阳性者为生化妊娠，5周后阴道B超检测到宫内孕囊，卵黄囊及心管搏动者确诊为临床妊娠。 1.6 统计分析
结果以x-±s或%表示，采用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析，计量资料的统计采用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
45例不孕不育夫妇共接受IUI治疗86周期，临床妊娠14个周期，周期妊娠率为16.3%，其中上游法处理精液行IUI治疗54周期，临床妊娠10个周期，周期临床妊娠率为18.5%，密度梯度离心法处理精液行IUI治疗32周期，临床妊娠4个周期，周期临床妊娠率为12.5%。 2.1 两种方法处理后精液质量的比较
两种方法处理后精液在平均体积之间无显著性差异，但密度梯度离心法处理后的精子浓度明显高于上游法处理后的精子，而活动率、a+b级精子百分率明显低于上游法处理后的精子，有显著性差异(P<0.05，见表1。
表1 两种方法处理后精液质量的比较平均体积(ml 浓度(×106/ml 活动率(% a+b级精子百分率(%上游法 0.7±0.13 51.2±26.93 94.7±1.39 90.2±2.04密度梯度离心法 0.6±0.11 82.0±32.99* 81.2±16.24* 74.2±20.72**与上游法相比，P<0.05 2.2 两种方法处理精液后行IUI妊娠率的比较
上游法处理精液行IUI周期临床妊娠率为18.5%，密度梯度离心法处理精液行IUI周期临床妊娠率为12.5%，两组相比无显著性差异(P>0.05。 3 讨论
IUI精液处理的目的是消除精浆所含精子获能抑制因子、前列腺素、死精、不活动精子、白细胞及一些杂志碎片等有害成分，以利于提高IUI的妊娠率[1]。目前常用的精液处理方法主要有上游法和密度梯度离心法两种。现在一般认为：上游法适用于精子数量，活率，活力均较高的精子的处理，此法是借助于精子自身的游动能力，通过液体界面游到培养液从而达到精子优选的目的。其优点是分离时对精子损伤小，获得的精子活率，活力均较高，操作简单，成本低；缺点是耗时长。密度梯度法更适用于少，弱，畸形精子症的精子的处理，此法是根据精液中不同成分的密度差异离心后达到分离优质精子的目的。其优点是洗涤效果好，可以完全去除精液中的白细胞，上皮细胞等物质，减少畸形精子，精子的回收数量较高，不易被污染；缺点是反复离心过程中对精子可能有一定的损伤。[2] 本文作者回顾分析比较了两种精子优选方法处理精液标本的精液质量和临床妊娠率。发现密度梯度离心法处理后的精子浓度明显高于上游法处理后的精子，而活动率、a+b级精子百分率明显低于上游法处理后的精子，说明密度梯度离心法精子回收率高于上游法，但回收精子的质量较上游法低。同时两种方法处理后的精液行IUI妊娠率无显著差别，这说明当处理后a+b级精子总数达到一定量时，各种精液参数的变动对IUI的成功率并无显著影响[3]。本研究结果与国内其他一些研究[4]的结论不一致，这可能与病例数，实验室操作等多种因素有关，有待于进一步扩大样本进行研究。
综上所述，密度梯度离心法精子回收率高于上游法，但回收精子的质量较低，两种方法处理精液对IUI的成功率无显著影响。参考文献

[1] 熊承良，吴明章，刘继红.人类精子学[M].武汉：湖北科学技术出版社，2002：63. [2] 左阳花.不同方法处理不同质量精液行IUI临床妊娠率分析[J].中国优生与遗传杂志，2010，18(7：122-123. [3] 朱亮，邢福祺.影响夫精宫腔内人工授精成功率的相关因素[J].广东医学，2007

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