微生物检验操作步骤

微生物检验操作步骤

样品制备：

取样品 10 g/ml加入至 90 ml灭菌生理盐水中，混匀，制成 1 ︰ 10 的稀释液；

菌落总数：（结果报告：XXX cfu /g(ml)）

取上述 1 ︰ 10 的稀释液 1 ml加入至 9 ml灭菌生理盐水中，充分混匀，

制成 1 ︰100 的稀释液；

取上述两个稀释级的稀释液分别加入2块平皿中，每块平皿中加 20 ml，然后往平皿中倒入约45℃的 卵磷脂吐温80琼脂 培养基，待培养基凝固，倒置放于36+/-1 ℃培养箱中培养 48 h，点计菌落数。

霉菌和酵母菌：

操作同菌落总数，加入的培养基为 虎红 培养基，待培养基凝固，倒置放于 ℃培养箱中培养 72 h，分别点计霉菌和酵母菌数。

粪大肠菌群：（结果报告（未）检出/ ）

取上述 1 ︰ 10 的稀释液 10 ml加入至 10 ml 双倍乳糖胆盐 培养基中，摇匀，置 44 ℃培养箱中培养 48 h；

如果培养物产 酸 产 气 （现象为培养基呈 黄 色，小倒管内有 气泡 ），则应取培养物分别接种至 伊红美蓝琼脂 平板于 37 ℃培养 18-24 h和 蛋白胨水 培养基中于 44 ℃培养 24 h。

在上述平板上，粪大肠菌群呈 深紫黑 色、圆形突起的菌落，并有 金属 光泽。

挑取分离的单个菌落，进行 革兰氏 染色和镜检，在显微镜下应观察到 红 色 短杆 状的菌。挑取菌落时，应使灭菌的接种环 冷却 后再行操作。

上述 蛋白胨水 培养基的培养物还需做 靛基质 试验，阳性现象为培养物表层出现 玫瑰红 色。

铜绿假单胞菌：（结果报告（未）检出/ ）

取上述 1 ︰ 10 的稀释液 10 ml加入至 90 ml SCDLP 培养基中，摇匀，置 37 ℃培养箱中培养 18-24 h；

挑取上述培养物，接种至 十六烷基三甲基溴化铵琼脂 平板于 37 ℃培养 18-24 h；在该平板上，铜绿假单胞菌应为 灰白色 色、圆形湿润的菌落，周围培养基溶有 水溶性 色的色素；

挑取分离的单个菌落，染色镜检，在显微镜下应观察到 红 色 杆 状的菌。

如果平板上只分离到1个可疑菌落，不够做生化试验，则应 挑取该菌落于SCDLP增菌培养 。

取分离的菌落分别做 氧化酶 试验、 绿脓菌素 试验、 硝酸盐还原产气 试验、 明胶液化 试验和 42℃生长 试验。

金黄色葡萄球菌：

增菌培养同铜绿假单胞菌项下，

挑取上述增菌液的培养物，接种至 B-P 平板于 37 ℃培养 24-48 h；在该平板上，金黄色葡萄球菌应为 灰黑 色、圆形的菌落，菌落周围有 混浊 带和 透明 环

挑取分离的单个菌落，染色镜检，在显微镜下应观察到 紫 色 球 状的菌。

取分离的菌落分别接种至 甘露醇发酵 培养基和 肉汤 培养基中，于 37 ℃培养 24 h；取上述肉汤培养物，做 血浆凝固酶 试验。

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/0ca9902f5122aaea998fcc22bcd126fff6055d5c.html