脑胶质瘤中Th1／Th2细胞因子的表达及意义

发布时间：2016-04-07 14:35:37 来源：文档文库

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脑胶质瘤中Ｔｈ1／Ｔｈ2细胞因子的表达及意义

【摘要】目的：探讨脑胶质瘤Th1/Th2细胞因子不平衡表达状况及其意义。方法：逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测脑胶质瘤组织中以IL-2、IFN-γ代表的Th1类细胞因子和以IL-4、IL-10为代表的Th2类细胞因子的表达。结果：30例胶质瘤组织标本各细胞因子的阳性表达率为：IFN-γ 13.33%、IL-2 16.67%、IL-4 56.67%、IL-10 76.67%。Th1类细胞因子总的表达率为15%，Th2类为66.67%，Th2类细胞因子的表达明显高于Th1类（P0.05）。结论：脑胶质瘤存在明显的Th1/Th2失衡，可能与脑胶质瘤的发生、发展及免疫逃逸有关。

【关键词】脑胶质瘤；细胞因子

1资料和方法

1.1一般资料：本组中30例患者均为本院神经外科2003年2月-2005年12月的住院患者，其中男18例，女12例，年龄7-62岁，平均40.3岁。经临床和病理证实为脑胶质瘤患者，所有患者术前均未接受过放疗、化疗及免疫治疗，病理分类按WHO新的胶质瘤分类分级标准（2000年）：多形性胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤为Ⅳ级；间变性少枝胶质细胞瘤为Ⅲ级；少枝胶质细胞瘤、星形细胞瘤为Ⅱ级；毛细胞型星形细胞瘤、黏液乳头状室管膜瘤为Ⅰ级。以10例脑疝减压术患者脑组织标本为对照。

1.2新鲜标本的处理：手术所取瘤组织及瘤旁组织约1 cm3，去除血管及坏死组织后Hanks液洗涤2次，剪碎经100目不锈钢网过滤后离心，淋巴细胞分离液分离单个瘤细胞，洗涤备用。

1.3检测指标及PCR引物：以IFN-γ、IL-2代表Th1类细胞因子，以IL-4、IL-10代表Th2类细胞因子，β-actin为内参照。引物序列见表1。

1.4RT-PCR：Trizol一步抽提法提取细胞总RNA。每例标本均同时检测β-actin和IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10 4种细胞因子，每管取等量细胞总RNA 6~10 μg，加入5×PCR buffer 8 μl，0.1 mol/L DTT 2 μl，dNTP 1 μl，M-MLV 1 μl（200 U），上下游引物各1 μl，总反应体积40 μl。37℃作用1小时后，95℃ 10分钟灭活M-MLV。M-MLV逆转录酶购自Gibco公司。聚合酶链反应（PCR）：每管取RT产物5 μl，10 μl,10×Buffer 8 μl，25 mmol/L MgCL2 2 μl，dNTP 1 μl，上下游引物各1 μl，Taq DNA聚合酶1 μl，总反应体积为50 μl。循环条件为95℃预变性5分钟，94℃ 1分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟，30个循环，最后72℃延伸7分钟。