苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位
作者：朱睿;张振韬;左其生;刘志永;韦光辉;李东;连超;张亚妮;李碧春
作者机构：扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏扬州225009
来源：中国畜牧杂志
ISSN：0258-7033
年：2014
卷：050
期：009
页码：82-87
页数：6
中图分类：S831.2
正文语种：chi
关键词：CVH基因;亚细胞定位;EGFP;间接免疫荧光;多克隆抗体;黄鸡
摘要：本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区,分别构建真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,并用pcDNA3.1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体.pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH分别转染COS-7细胞,进行间接免疫荧光实验和CVH-EGFP融合蛋白亚细胞定位,并通过RT-PCR、Western blot进一步检测蛋白的表达.结果表明:克隆出CVH基因的完整CDS,构建了真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,成功制备了多克隆抗体,转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中,RT-PCR和Western bolt分别检测到1 989 bp特异条带和100 ku的融合蛋白.真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好,效价为1∶200,CVH基因蛋白在细胞质中表达,为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础.
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/f3eede4ddc80d4d8d15abe23482fb4daa48d1d5c.html
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