系统性红斑狼疮患者血浆一氧化氮及过氧化脂质的变化
2010-02-22 赵欣欣 赵丽娟
【摘要】 目的 检测SLE患者血浆中一氧化氮(NO)和过氧化脂质(LPO)水平，分析两者的关系。方法 用生物还原法和比色法测定血浆中NO－2/NO－3总浓度，以此代表血浆中NO水平，用TBA显色法测定LPO浓度。34例SLE患者中23例为初次治疗的活动期SLE，其中15例口服强的松(1 mg/kg)治疗，11例为稳定期SLE，30例健康人为对照组。结果 活动期SLE血浆NO水平(51.31±30.23)μmol/L高于正常对照组(36.56±21.50)μmol/L，15例活动期SLE治疗一周后血浆NO水平由(59.26±29.79)μmol/L降至(46.50±24.21)μmol/L，且活动积分下降。活动期SLE血浆LPO水平(5.69±2.22)μmol/L显著高于对照组(3.97±0.74)μmol/L，血浆NO水平与LPO水平无直线相关性。结论 血浆NO水平可作为SLE活动指标之一，糖皮质激素对NO合成有抑制作用，活动期SLE体内存在氧化损伤，但氧化损伤与NO关系尚不明确。
【关键词】 红斑狼疮，系统性 一氧化氮 过氧化脂质类
Change of plasma no and LPO levels in SLE ZHAO Xinxin,ZHAO Lijuan.First Clinical College,China Medical Unversity,Shenyang 110001
【Abstract】 Objective To determine the levels of plasma nitric oxide(NO) and lipid peroxides(LPO) of patients with systemic lupus erythematosus(SLE),and analyse the relationship between them.And to observe the NO level change of active SLE patients before and after treatment with prednisone (1 mg/kg).Methods Plasma NO-2/
NO-3 (stable end production of NO in plasma) levels of 34 SLE patients (23 active SLE patients,11 stable SLE patients) and 30 healthy subjects were determined by organism reduction and spectrophotometric assays.The levels obtained represented NO levels in plasma.Plasma LPO levels were determined by the thiobarbituric acid (TBA) reaction.Results The level of plasma NO of active SLE group was higher than that of healthy group (51.31±30.23)μmol/L,(36.56±21.50)μmol/L.The level of plasma NO after one week treatment declined from (59.26±29.79)μmol/L to (46.50±24.21)μmol/L with the SLE DAI dropped average 3.31 score (0～18 score).The level of plasma LPO of active SLE group was higher than that of healthy group (5.69±2.22)μmol/L，(3.97±0.74)μmol/L.Although the levels of both plasma NO and LPO were higher in SLE,no obvious relationship was observed between them.Conclusion Results show that the level change of plasma NO is consistent with the results of other authors' animal studies.The level of plasma NO can be considered one of the standards of SLE activity.Glucocorticoids can inhibit NO synthesis.There is oxidative injury in active SLE.The relationship between oxidative injury and NO is not sure.
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic Nitric oxide Lipid peroxides
一氧化氮(NO)不仅具有重
要的血管舒张作用，而且还参与许多炎症反应，与许多细胞因子间存在相互作用〔1〕。实验已证明免疫复合物性炎症时内源性NO的合成是增加的，抑制NO合成有助于减轻炎症反应，减少组织损伤〔2〕。系统性红斑狼疮(SLE)是由免疫复合物介导的血管炎性疾病，研究发现狼疮鼠内源性NO合成增加，抑制NO合成不影响抗双链DNA抗体产生，但病情可得到缓解〔3〕。目前对人类SLE患者体内NO合成的研究尚少，本文对34例SLE患者及30名健康人的血浆NO水平进行了测定，并对其中活动期SLE患者15例在用强的松治疗一周前后NO水平的变化进行了观察，同时还检测了活动期SLE患者和20名健康者的血浆过氧化脂质(LPO)，以期观察NO与LPO间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
按1982年美国风湿病学会制定的SLE分类诊断标准确诊的SLE患者34例，其中23例为初次治疗的活动期SLE，活动积分2～18分，11例为经治疗后的稳定期SLE，活动积分0～1分(积分采用史群〔4〕所用方法)。34例中男3例，女31例，平均年龄34.8岁(17～62岁)。健康对照组30名，男4名，女26名，平均年龄35.1岁(22～50岁)。空腹外周血3 ml，肝素抗凝，4 ℃离心(3 000 r/min，15分钟)分离血浆，－80 ℃保存少于3个月待检。
1.2 主要试剂及仪器
磺胺、盐酸萘乙烯二胺、硫酸锌、盐酸、磷酸、甲酸铵、磷酸氢二钠、硝酸钾、亚硝酸钠、硝酸钠，以上均为国产分析纯级试剂。四乙氧基丙烷、硫代巴比妥酸、甲醇—正丁醇溶液为日本和光纯药工业公司产品。营养肉汤为浙江军区后勤部卫生防疫检验所产品。埃希氏大肠杆菌标准株25922由本院细菌室提供。紫外/可见分光光度计DU-640为美国Beckman公司产品。
1.3 方法
1.3.1 外周血NO－2/NO－3水平测定：NO－2/NO－3为NO在体内的稳定代谢产物，本实验采用生物还原法和比色法〔5〕测定血浆中NO－2/NO－3的浓度，并以此代表血浆中NO的水平。本实验对原方法略作改变，简述如下：首先培养能产生硝酸盐还原酶的埃希氏大肠杆菌，用营养肉汤配制液体培养基，并按5.56 g/L向培养基中加入硝酸钾，高压灭菌后分装并接种埃希氏大肠杆菌标准菌株25922，37 ℃严格厌氧培养18小时，4 ℃离心(3 000 r/min，15分钟)收获并用PBS洗涤细菌三次，按湿重每1.0 g细菌加10 ml PBS制成细菌悬液，－80 ℃保存不超过一周待用。血浆标本去蛋白(30%硫酸锌，体积分数为0.05标本)，取去蛋白后的血浆标本，每份两管，每管0.2 ml，各加入甲酸缓冲液0.2 ml(含0.2 mol/L甲酸铵，0.1 mol/L磷酸氢二钠，pH 7.3)，稀释10倍后的埃希氏大肠杆菌悬液0.2 ml，37 ℃水浴2小时(在这一条件下能将全部硝酸盐还原为亚硝酸盐)，然后离心沉
淀细菌，取上清0.4 ml 与Greiss试剂(1%磺胺—2.5%磷酸与0.5%盐酸萘乙烯二胺—2.5%磷酸等体积混合的溶液)1.6 ml混合放置30分钟，在紫外/可见分光光度计以543 nm波长比色，调零管以双蒸水代替血浆，其余操作步骤相同，记录吸光度，然后在10～200μmol/L的亚硝酸钠的标准曲线上找出对映的NO－2浓度，此即NO－2/NO－3总浓度。
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/f2fbbb4ee518964bcf847c18.html
