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RNA提取操作步骤

发布时间：2023-02-23 09:35:07 来源：文档文库

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RNA提取操作步骤准备试剂：氯仿、异丙醇、RNase-freeddH2O、75%乙醇（用RNase-freeddH2O配）1、匀浆处理：a、动物细胞：以小鼠肝脏RNA为例。取新鲜或放置-80℃冻存组织，每30-50mg组织加入1mlTRNzol，用匀浆仪进行匀浆处理，样品体积一般不要超过TRNzo体积的10%；b、单层培养细胞：单层贴壁细胞的收集，收集的数量不要2、将匀浆样品在15-30℃放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离；3、可选步骤：4℃12000rpm离心10分钟，取上清。4、每使用1mlTRNzol加入0.2ml氯仿，盖好瓶盖，剧烈震荡15秒，室温放置3分钟；5、4℃12000rpm离心10——15分钟，样品分为三层，黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要位于水相中，把水相转移至离心管中；6、在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置20——30分钟；7、4℃12000rpm离心10分钟，去上清，离心前RNA沉淀通常是看不见的，离心后可以在管侧和管地形成胶状沉淀。
8、加入1ml75%乙醇，洗涤沉淀，每使用1mlTRNzol至少用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤；9、4℃5000rpm离心3分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀；10、室温放置晾干（不要太过，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾2——3分钟即可，根据实验需要，加入30——100ulRNase-freeddH2O，反复吹打混匀，充分溶解RNA。

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/e77681d7cdbff121dd36a32d7375a417876fc195.html