总氮量的测定

总氮量的测定-----微量凯氏定氮法（Kjeldahl）

适用范围：0.2-1.0mg氮

1. 仪器设备

烘箱、剪刀、微型植物粉碎机、封口袋若干、微量凯氏定氮仪、凯氏烧瓶（50ML）、容量瓶（50ML）、锥形瓶（50ML）、滴定管（5ML）、吸量管（5ML和2ML）、量筒、表面皿、消化架和蒸馏装置等。（生物化学实验指导、北京大学生物系生物化学教研室编、人民教育出版社、1964，53）

2. 试剂准备

长条硫酸纸、蒸馏水、硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、过氧化氢、2％硼酸溶液、0.2％甲基红酒精溶液、0.1％次甲基蓝酒精溶液

3. 操作方法

3.1 制干粉

植物材料洗涤后，干之，置100～150℃下烘干30min后杀死，再放在70～80℃下烘干3H，磨细，以0.9毫米孔筛筛后放入封口袋中，标号备用。

3.2 消化

a. 首先以减重法准确称取0.2g样品并测定其含水量

b. 然后称取0.2g样品以长条硫酸纸放入凯氏烧瓶底部，用滴管加入几滴蒸馏水以湿润样品

c. 加入0.2g硫酸铜-硫酸钾混合催化剂（K2SO4:CUSO4·5H2O按5：1混合）

d. 再徐徐加入5ML硫酸

e. 另取凯氏烧瓶不加样品以测定试剂中微量氮作为比照

f. 之后均放在消化架上，转放入通风厨内，用小火加热煮沸，瓶内水气蒸完时，硫酸开始分解入出SO3的烟后，调节火焰保持瓶内液体轻轻沸腾，继续消化。

1 如消化6h后溶液仍呈黄色，可取下烧瓶，冷却后加30％的H2O2，继续用小火加热，直至消化液透明无色或呈淡蓝色为止。

2 如呈黄色，则表示消化尚不完全。

在消化过程中要时时转动烧瓶，使样品始终在浓硫酸的回流中。

g. 消化结束后，关闭火焰，取下烧瓶，冷却至室温，将消化液移入50ML容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤3次，将洗涤液并入容量瓶中，并定容。

3.3 蒸馏

a. 取50ML锥形瓶，以蒸馏水洗涤2～3min，冷后，加入约5ML2％硼酸溶液及4滴（约0.05ML）混合指示剂(0.2％甲基红酒精溶液与0.1％次甲基蓝酒精溶液以2：1混合)，溶液呈棕紫色，用表面皿覆盖后以备吸氨用。

b. 将预先放有几滴经过硫酸化过的蒸馏水的蒸汽发生器煮沸，关闭夹子，使蒸汽通过反应器，由冷凝管下端逸出。冷凝管下端放一空烧杯以承接凝聚的水滴。这样以蒸汽洗涤冷凝器约10min后，在冷凝器下端放一盛有硼酸溶液的锥形瓶，其位置应倾斜。冷凝器顶端应完全浸没在液体内。继续以蒸汽洗涤1～2min。观察锥形瓶内溶液是否变色，如不变色，则说明整流器内部是干净的。

c. 向下移动锥形瓶使硼酸液面离开冷凝管口约1CM，继续通蒸汽1min.最后用水冲洗冷凝管外口，减小火焰。打开夹子(掌握夹子或玻璃塞很重要，若不紧，刚有氨逸出而影响测定的准确性。在加样品时，一定要打开夹子，而且要在蒸汽发生后才能关闭，否则就会发生样品倒吸现象。)将消化液移入蒸馏器反应室内。用水冲洗凯氏瓶3次（每次用2ML），将洗涤液倾入反应室。塞紧反应室上的棒状玻璃塞。

d. 另取一盛有硼酸溶液的锥形瓶，放在冷凝管下，使冷凝管完全浸没在液体内。取约10ML30％的NaOH溶液放入小烧杯，轻提反应室上的玻璃塞，使之慢慢流入反应室。在未完全流入时，应将玻璃塞盖紧，向玻璃杯中加入约3ML的蒸馏水，再轻提反应室上的玻璃棒，使一半蒸馏水流入反应室，一半流在玻璃杯中作水封。

e. 用煤气灯将水气发生器加热，沸腾后，夹紧夹子，开始蒸馏。锥形瓶中硼酸溶液由棕紫色变成蓝绿色。自变色时记时，蒸馏约3～5min.移动锥形瓶使硼酸溶液面离开冷凝管约1CM，并用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外面，继续蒸馏1min，挪开锥形瓶，用表面皿覆盖锥形瓶。最后松开夹子，移去煤气灯。

f. 蒸馏结束后，为了洗涤反应室，拧紧夹子，一手捏紧橡皮塞，一手轻提棒状玻璃塞，使冷凝水迅速流入反应室。用反应室外壳内蒸汽冷缩，反应室中残渣自动吸入反应室外壳，塞住玻璃塞，取约20ML蒸馏水加入小玻璃杯中，启开玻璃塞，冷水再次由小玻璃杯流入反应室，又自动吸出。如此冲洗3～4次，将夹子拧开，排除反应室外壳中积水。关闭塞子，再使蒸汽通过全套蒸馏仪数分钟后，继续下一个蒸馏。

3.4 滴定

全部蒸馏完毕后，以0.01mol/L HCl滴定各锥形瓶中收集的氨，直至硼酸溶液出现淡紫色（即滴定终点）为止（蒸馏和滴定时空气中不能有酸性蒸汽）。

4 结论

按下面公式计算样品中的总氮量：

样品中的总氮量（g氮％）=[(A-B)*m*14]/(W*1000)*100

式中：A--为滴定样品用去的盐酸毫升数

B--为滴定空白用去的盐酸毫升数

m--标准盐酸的mol数

14--为氮的原子量

W—为加样重量

5 注意事项

在蒸馏样品和空白对照之前，必须取2ML标准硫酸铵溶液（0.3mg氮/ml）代替样品，作硫酸铵溶液中氮的回收率测定。以2ML配置硫酸铵的蒸馏水为空白对照。回收率误差不得超过98±2％.

本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/b25c6118ff00bed5b9f31d8c.html