岛津LC-10AT型高效液相色谱仪操作规程

发布时间：2016-06-25 11:21:10 来源：文档文库

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岛津LC-10AT高效液相色谱仪操作

4.1仪器构成

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成。

4.2 准备

准备烟嘧磺隆检测所需的流动相，检测流动相条件为甲醇：水：乙酸=（60:40:0.5）V/V，分别配置流动相混合后，用真空泵抽负压，用溶剂过滤器经0.45μm滤膜进行过滤，超声波清洗器充分脱气20min。放置在室温冷却待用。根据烟嘧磺隆的分析条件选取安捷伦C18（250*4.6*0.5μm）色谱柱进行洗脱柱。配制样品和标准溶液，用0.45μm微孔滤膜过滤待进样。检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3 开机：接通电源，依次开启不间断电源、LC-10AT泵、SPD-10Avp检测器，待检测器自检结束后，显示“check λ”后出现， “check good”提示后，确认检测器工作正常。然后打开计算机，最后打开N2000色谱工作站。

4.4 参数设定

1．波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入烟嘧磺隆检测所需波长值，波长为：254nm，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。

2．流速设定：受仪器条件所限，在本实验中烟嘧磺隆的洗脱采用预先混合好的流动相进行等度洗脱，在输液泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速为（1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。

4.4 更换流动相并排气泡

将带有吸滤头的管路放入装有准备好的流动相：甲醇：水：乙酸=（60:40:0.5）V/V的储液瓶中，逆时针转动输液泵的排液阀180°，打开排液阀；按输液泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，观察管路当中没有气泡存在，3min后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。确定管路中的气泡完全排尽。

4.5 平衡系统

按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。按输液泵的[pump]键，输液泵同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。冲洗时间约为15min，检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除，确定系统稳定。观察输液泵控制屏幕上的压力值，色谱柱前压力波动不超过0.6MPa。同时观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，准备测定烟嘧磺隆样品。

4.6 进样

进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取烟嘧磺隆标样及样品。为确保每次进样的准确性及重复性良好，本实验所有样品进样均采取定量环满环进样的方式进样。将样品均匀的推入Rheodyne 7725i手动进样阀中，进样阀扳回Inject位置点击工作站中采集数据，对烟嘧磺隆样品进行分析。