微生物与感染２ｏｏ８年ｌ２月第３卷第４期Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２００８，Ｖｏｌ ３，Ｎｏ．４
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艾滋病患者ＡＰＯＢＥＣ３ Ｇ基因的克隆和真核表达
王珍燕 ’ 江雪艳 张云智 卢洪洲 。
【摘要】 目的
建立艾滋病（ＡＩＤＳ）患者载脂蛋白Ｂ ｍＲＮＡ编辑酶催化多肽样蛋白３Ｇ（ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ）的真核表达体系。
方法
采用反转录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术从ＡＩＤＳ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中获取ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ基因编码区，将
其克隆到ｐＭＤ１８．Ｔ载体上，测序验证正确后再将其转接入真核表达载体ｐＥＧＦＰ—Ｎ１中，然后将重组质粒ｐＥＧＦＰ．Ｎ１一Ａ３Ｇ转染 ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，分别用ＲＴ—ＰＣＲ法和蛋白印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法）验证ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。结果从
ＡＩＤＳ患者体内克隆的ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ基因编码区长度为１ １５４ ｂｐ，测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ参考序列（ＮＭ０２１８２２）比对 发现存在２处差异，分别位于ｍＲＮＡ第５８８位和７４６位碱基处。重组质粒ｐＥＧＦＰ—Ｎ１一Ａ３Ｇ转染ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，在荧光显微镜 下观察到融合蛋白Ａ３Ｇ—ＥＧＦＰ的表达，ＲＴ—ＰＣＲ法和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法分别验证了蛋白在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。结论成
功构建了ＡＩＤＳ患者ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ蛋白的真核表达体系，为进一步研究ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ在ＨＩＶ一１感染中的作用奠定了基础。
【关键词】ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ；真核表达；艾滋病
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ ｇｅｎｅ ｏｆ ＡＩＤＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ
＾＾Ｇ Ｚｈｅｎ—ｙａｈ，ⅢＮＧ Ｘｕｅ—ｙａｈ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕｎ—ｚｈｉ，ＬＵ ｔｔｏｎｇ—ｚｈｏｕ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｃｅｎｔｅｒ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１５０８．Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｂ ｍＲＮＡ—ｅｄｉｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ，ｃａｔａｌｙｔｉｃ
ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ・ｌｉｋｅ ３Ｇ（ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ）ｏｆ ＡＩＤＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ＡＰＯＢＥＣ３Ｇ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ（ＰＢＭＣｓ）ｏｆ ＡＩＤＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ．ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｊｎｔｏ ｐＭＤ１８．Ｔ ｖｅｃｔｏｒ．Ａｆｔｅｒ ａ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅａｔｉｏｎ．ｔｈｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｉｎｔｏ ｐＥＧＦＰ—Ｎｌ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＧＦＰ—Ｎ１． Ａ３Ｇ．Ｔｒａｎｓｆｅｃｔ ＨＥＫ２９３Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐＥＧＦＰ—Ｎ１．Ａ３Ｇ．ａｎｄ ｕｓｅ ｔｈｅ ｍｏｔｈｏｄ ｏｆ ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ
