血糖的测定
1、实验目的
1.掌握测定血糖含量的原理和方法；
2.掌握离心机和分光光度计的使用方法。
2、实验原理
1.动物血液中的糖主要是葡萄糖。正常情况下，动物血糖浓度相对恒定，健康家兔的血糖水平为0.80~0.120mg/ml。
2.葡萄糖是一种多羟基的醛类，其醛基具有还原性。当其与碱性铜混合加热后，醛基氧化成羧基，并生成红黄色的Cu2O沉淀。Cu2O又可使磷钼酸还原生成钼蓝，使溶液呈蓝色，蓝色深度与微米中葡萄糖浓度成正比，无蛋白质滤液与葡萄糖标准液进行分光光度，测定出葡萄糖含量。
3、试剂与器材
碱性铜试剂，磷钼酸试剂，葡萄糖标准应用液，1：4磷钼酸稀释液，无蛋白质滤液
分光光度计，恒温水浴锅，刻度吸管，玻璃漏斗，锥形瓶，血糖管，试管
4、实验步骤
取4支血糖管
试剂 | 空白 | 标准 | 样品1 | 样品2 |
无蛋白质滤液 | ||||
蒸馏水 | ||||
葡萄糖标准应用液 | ||||
碱性铜试剂 | ||||
混合，置沸水中煮8mn，于流动冷水内冷却3min（勿摇动） | ||||
磷钼酸试剂 | ||||
混匀，放置2min（使气体逸出） | ||||
1：4磷钼酸稀释液 | ||||
混合后立即用空白液调“0”点，在620nm波长处测定并读取各试管光密度值 | ||||
5、实验结果与讨论
测定的分光光度为： 0.000 0.393 0.391 0.421
葡萄糖含量（mg/ml）＝(测定管吸光度/标准吸光度)*葡萄糖标准应用液（mg/ml）*10
＝0.93mg/ml
分析：动物正常的血糖范围是0.80~0.120mg/ml，本实验中渢 的血糖浓度0.93mg/ml，处于正常范围内。但相对其他同学渢的数据来看，所得的血糖浓度有明显的区别，造成这样的原因可能是：1添加各种试剂时，不够谨慎，导致多加或少加，以至于测出的血糖含量有差别。2各步反应中，反应时间不足，导致实验不完全，以至实验有误差。3在加入试剂进行分光测定时，试剂的量少于测量皿体积的2/3，导致吸收光度，测量值不准确，导致血糖测量含量有区别。
6、思考题
1.此法测定葡萄糖的原理是什么？
答：葡萄糖是多差羟基醛，醛基具有还原性。其与碱性铜反应，生成Cu2O沉淀。Cu2O又可使磷钼酸还原成钼蓝，使溶液变
成蓝色，蓝色深浅与血液中血糖浓度成正比。在实验时，无蛋白血滤液作为0吸光度参考点，待测定标准的葡萄糖应用液吸光度，通过光度吸收与浓度之间的正比关系。由公式血糖浓度＝(测定管吸光度/标准吸光度)*葡萄糖标准应用液（mg/ml）*10，可得血糖浓度。
2.实验中，如果测定管颜色明显深于或浅于标准管颜色时，应做怎样处理？
答：正常情况下，动物血糖的浓度在0.80~0.120mg/ml，当测定管颜色明显深于或浅于标准管颜色时，测定出的血糖浓度可能有很大误差。处理的方法为：1当测定管深于标准应用液时，应检查实验各步骤加入的试剂是否足量或是否加错，特别是最后一步加入1：4磷钼酸稀释液是否加入正确。若步骤有错，则重新做过，若实验步骤正常，则适量增大加入的1：4磷钼酸稀释液体积或用少量蒸馏水稀释；2当测定管浅于标准应用液时，同样要考虑实验步骤的正确性，另外要适当加入少量磷钼酸到试管中，使颜色比较均衡。
本文来源：https://www.2haoxitong.net/k/doc/36508885700abb68a982fbc9.html
文档为doc格式