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鸡枞菌的培养条件研究

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第27卷第1期食品与生物技术学报Vol.27　No.1　　　　　　　　　　　　　　2008年1月Jan.　2008JournalofFoodScienceandBiotechnology文章编号:167321689(20080120067204　
鸡枞菌的培养条件研究
胡尚勤,　刘天贵,　李贤柏
(重庆师范大学生命科学学院,重庆400047
摘　要:研究鸡枞菌营养要求,实现鸡枞菌的人工栽培。采用液体振荡培养法,研究鸡枞菌菌丝体
对不同矿物质、维生素、氨基酸等营养物质的需要。结果表明,鸡枞菌菌丝体在葡萄糖为碳源,氨基酸为氮源时,最适C/N为12～14∶1。在分别以谷氨酸、天门冬氨酸和精氨酸为氮源时,鸡枞菌菌丝体的生长最好,其生物量最高,鸡枞菌菌丝体对Ca2+的需要量最大,其次是K1+和Mn2+。对VB1、VB2、VB3、VB5、VC、VM的需要量在3.5mg/L时鸡枞菌菌丝体生物量最高,对VB6、VB12的需要量在2.0～2.5mg/L时,其菌丝体生物量最高。关键词:鸡枞菌;菌丝体;营养;影响;液体中图分类号:Q939.9
文献标识码:A
ResearchoftheNutritionRequirementoftheTermitomycesAlbuminosu
HUShang2qin,　LIUTian2gui,　LIXian2bo
(CollegeofLifeSciences,ChongqingNormalUniversity,Chongqing400047,China
Abstract:Theeffectofmineralsubstance,vitaminsandaminoacidsontheTermitomyces
albuminosusmyceliumgrowthonthesubmergedculturewascarefullyinvestigated.Theresults
showedthatthemostsuitableC/Nwas12～14∶1whengrownonglucoseandaminoacidmedium.ThehighestofTermitomycesalbuminosuwasachievedwhenGlu,AspandArgusedasnitrogensource.ThemostrequiredmineralsubstanceforT.albuminosumyceliumwastheCa2+,nextwastheK+andMn2+.ThebiomassachievedhighestwhentheVB1,VB2,VB3,VB5,VC,VMwas3.5mg/LandtheVB6,VB12is2.0～2.5mg/L,respectively.Keywords:Termitomycesalbuminosus;mycelium;nutrition;effect;liquid
　　鸡枞菌(Termitomycesalbuminosus隶属于担
子菌纲(Basidiomycotina、伞菌目(Agaricales、白蘑科(Trichomatace、鸡枞属(mitamyces[1-2]。自从Berkley对鸡枞菌进行分类研究以来,国内外学者对该菌与白蚁的共生关系、地区分布、生态关系以及形态学进行了大量研究[3-4]。长期以来,人们希望将这种野生珍稀食用菌人工驯化成栽培种,但是由于鸡枞菌与白蚁共生,其子实体仅能在白蚁剿
　　收稿日期:200721222.
　　基金项目:重庆市教委基金项目(KJ-050804.
上生长,鸡枞菌与白蚁二者间的生态关系背景和营
养关系复杂,这给鸡枞菌人工驯化带来了困难,人工栽培尚处在探索阶段,还不能完全人工栽培。在检索的国内外文献资料中尚未发现有鸡枞菌丝体营养要求的研究报道。作者旨在对鸡枞菌丝体营养要求进行全面研究,以寻找其限制性营养物质的种类和浓度的动力学基础,从而为鸡枞菌的人工栽培提供理论依据。
作者简介:胡尚勤(19502,男,重庆人,教授.主要从事食品与应用微生物领域的研究工作.Email:hushangqin@163.com©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net

68食　品　与　生　物　技　术　学　报　　　　　　　　　　　　第27卷　
mg/L,410mg/L和VB1,VB2,VB3,VB5,VB6,VB12,VC,VH,VM各2mg/L。配成pH值为610的矿物质试验培养基。D:以葡萄糖为碳源,分
1　材料与方法
111　材料
11111　菌种来源　鸡枞菌(Termitomycesalbu2
minosus从山东安慧真菌研究所购买。
11112　药品及试剂　葡萄糖,谷氨酸,甘氨酸,酪
别以不同种类氨酸为氮源,C∶N=14∶1,并加入
各种K1+,Na1+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+,Fe2+各2mg/L和VB1,VB2,VB3,VB5,VB6,VB12,VC,VH,VM各2mg/L。配成pH值为610的氨基酸试验培养基。
氨酸,亮氨酸,丙氨酸,异亮氨酸,丝氨酸,苯丙氨酸,苏氨酸,缬氨酸,精氨酸,半光氨酸,色氨酸,甲硫氨酸,天门冬氨酸,赖氨酸,组氨酸,天门冬酰氨,脯氨酸,10%盐酸,10%NaOH,VB1,VB2,VB3(泛酸,VB5,VB6,VB12,VC,VH,VM(叶酸,K1+,Na1+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+,Fe2+
上述各培养基配制好后,分别分装在250mL三角瓶中,每瓶100mL,121℃灭菌30min(维生素用过滤除菌后加入灭菌后的培养基中。
1.2.2　接种培养　①菌种活化培养,将鸡枞菌原种接种到(18cm×115cm的试管,培养基高度4cmPDA培养基上,22℃培养7d。②试验培养,
等。
11113　仪器设备　恒温制冷振荡培养箱:LRH2250型,广东省医疖器械生产;电热恒温干燥箱:DH229023A型,上海精宏实验设备有限公司产品;
将活化培养的鸡枞菌菌丝体用接种铲刮下加水(按每支斜面种菌丝体加入8mL无菌水的比例,用事先准备好的无菌组织粉碎机打成很细的菌丝体浆悬液,然后用无菌操作,分别接种上述A、B、C、D4类培养基,每瓶接种2mL;用菌浆悬液接种比直接用每支斜面接种4瓶更加均等。每组处理设6个重复和1个对照,将各处理组置于22℃恒温振荡培养箱中振荡培养96h。11213　菌丝体生长生物量的测定　各处理组在22℃培养96h后,过滤或离心收集菌丝体,烘干后称重,计算其生物量。
自动控制高压灭菌器:YXQ・WY21・600,日本Tomyseikoco产品;超净工作台:SW2CJ2IBU型,苏州净化设备有限公司产品;TDZ52WS多管架自动平衡离心机:4000r/min,XIANGYI,长沙湘仪离心机仪器有限公司产品;高速离心机:10000r/min,pHS22c型pH酸度计:四川成都方舟科技开发公司产品有限公司生产;万分之一阻力天平:TG328A型Xiangyi,上海精天电子仪器有限公司产品和FA1004型天平,上海精天电子仪器生产。112　方法
11211　培养基的配制　①PDA培养基[5-6]:A:以
2　结果分析
211　鸡枞菌菌丝体生长最适C∶N试验
葡萄糖为碳源,酪氨酸为氮源,精确计算和准确量,按碳氮质量比要求,C∶N为8∶1,10∶1,12∶1,14∶1,15∶1,18∶1,20∶1,22∶1,25∶1,并分别加入K1+,Na1+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+,Fe2+和VB1,VB2,VB3,VB5,VB6,VB12,VC,VH,VM各2mg/L,配成pH值为610的碳氮比液体培养基。B:以葡萄糖为碳源,酪氨酸为氮源,C∶N=14∶1,加入不同种类不同数量的维生素(VB1,VB2,VB3,VB5,VB6,VB12,VC,VH,VM,每升加入015mg,110mg,115mg,210mg,215mg,310mg,315mg,410mg,415mg,510mg不同浓度维生素和K1+,Na1+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+Fe2+各2mg/L矿质元素。配制
采用液体合成培养基A,接种后在22℃培养96h,过滤收集菌丝体,烘干后称重,计算其生物量,
结果见图1。
成pH值为610的液体维生素试验培养基。C:以葡萄糖为碳源,酪氨酸为氮源,C∶N=14∶1,并加入不同种类和不同数量的K1+,Na1+,Ca2+,Mg2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+,Fe2+各015mg/L,110mg/L,115mg/L,210mg/L,215mg/L,310mg/L,315
图1　鸡枞菌菌丝体在不同C∶N质量比培养基中生长曲线
Fig.1　Termitomycesalbuminosusgrowthcurveintheme2
diumofthedifferentC∶N
　　从图1中可见,以葡萄糖为碳源,酪氨酸为氮源时,鸡枞菌菌丝体生长最适C/N在(12～14∶1
©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net

　第1期胡尚勤等:鸡枞菌的培养条件研究69
,其鸡枞菌菌丝体生物量最高为1153～1165g/L,
是对照0142g/L的3193倍。其次是15∶1,其鸡枞菌菌丝体生物量为1152g/L。212　鸡枞菌菌丝体生长对维生素营养要求的试验
采用液体合成培养基B,接种后在22℃培养96h,过滤收集菌丝体,烘干后称重,计算其生物量,结果见图2。
图3　矿质元素对鸡枞菌菌丝体生长的影响
Fig.3　EffectofthemineraltogrowthoftheTerminto2
mycesalbuminosusmycelium
分别为01511～01526g/L、01464～01422g/L、01516～01467g/L、01512～01491g/L、01463～01481g/L、01406～01424g/L、01586～01592g/L和01421～01400g/L。平均是对照01180g/L的4192倍、5146倍、5157倍、5124倍、4161倍、6154倍和4156倍。214　鸡枞菌对氨基酸营养要求试验
采用液体合成培养基D,接种后在22℃培养96h,过滤收集菌丝体,烘干后称重,计算其生物量,
图2　鸡枞菌菌丝体生长与维生素的关系
Fig.2　Relationshipofthevitaminsandgrowthofthe
Termitomycesalbuminosusmycelium
　　从图2可看出,不同种类不同浓度的维生素对
鸡枞菌生长有一定影响。其中VB1在310～315mg/L时,鸡枞菌生长好,生物量为01136～01139g/L。VB2在315～0140mg/L时,鸡枞菌生长好,生物量为01307～01296g/L。VB3在0135～0140mg/L时,鸡枞菌生长好,生物量为01308～01305g/L。VB5在310～315mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01346～01308g/L。VB6在210～215mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01182～01165g/L。VB12在215～310mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01342～01350g/L。VC在310～315mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01198～01203g/L。VM在310～315mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01184～01191g/L。VH在215～310mg/L时,鸡枞菌生长好,其生物量为01240～01243g/L。是对照01101g/L的1135～3147倍。213　鸡枞菌对矿元素要求的试验
采用液体合成培养基C,接种后在22℃培养96h,过滤收集菌丝体,烘干后称重,计算其生物量,结果见图3。　　从图3可以看出,Fe2+在1～115mg/L、K1+在115～210mg/L、Na1+在110～115mg/L、Mg2+在015～110mg/L、Mn2+在115～210mg/L、Zn2+在110～115mg/L、Ca2+在215～310mg/L、Cu2+在015～110mg/L时,鸡枞菌菌丝体的生物量最高,
结果见图4。
图4　不同氨基酸对鸡枞菌菌丝体生长的影响
Fig.4　Effectofthedifferentaminoacidstogrowthof
theTermintomycesalbuminosusmycelium
　　从图4中可以看出,谷氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸、天门冬酰氨7种氨基酸对鸡枞菌菌丝体生长有明显促进作用,其生物量比其他氨基酸的高,分别为01620g/L、01431g/L、01437g/L、01376g/L、01396g/L、01333g/L、01331g/L。分别是对照01104g/L的5196、4114、4120、3162、3181、3120、3118倍。这7种氨基酸可
以看作是不可取代氨基酸。其中谷氨酸、精氨酸、和天门冬氨酸3种氨基酸不但有利于鸡枞菌生长,而且有刺激鸡枞菌生长的作用,因此,可以把它们看作既是不可取代氨基酸又可作为生长因子,这3
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